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猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒引起的猪肠道急性传染性疾病,以哺乳仔猪的高致病性和高死亡率为特征。近年来,猪流行性腹泻的大面积流行给中国乃至世界的养猪业带来了巨大的损失,引起了各国研究人员的关注。为了解现今流行的PEDV毒株的分子生物学特征以及利用原核表达PEDV N蛋白并制备高免血清,本文进行了以下方面的研究:1、PEDV Vero细胞适应株全基因组测序和分析:利用33对含有重叠区域的特异性引物扩增、克隆、测序了由本实验室分离保存的PEDV野毒CH/JX/01株第50代（CH/JX/01/P50）的全基因组序列,结果表明该病毒基因组全长为28,054nt,基因结构顺序与CV777一致,为5’UTR-ORF1a/b-S-ORF3-E-M-N-3’UTR;与CH/JX/01/P0、CH/JX/01/P5和CH/JX/01/P30比对发现其核苷酸并没有发生插入或者缺失的现象,但存在多个核苷酸位点的突变,突变位置主要集中在ORF1a/b、S、E和M基因,且S基因突变个数与低代次毒株相比呈现增加趋势。通过对CH/JX/01/P50的全基因组、S和N基因的遗传进化分析发现CH/JX/01的四代都属于G2亚群,而经典毒株CV777属于G1亚群。根据PEDV全基因组的遗传进化分析证实PEDV CH/JX/01与2015年陕西分离株NW8（MF782687）的亲缘关系最近,但基于S基因构建的进化树结果则表明,PEDV CH/JX/01株则与2014年广东分离株CH/GDZH02/1401（KR153325）和2015年广西分离株CH/GX/2015/750A（KY793536）的亲缘关系更近。对CH/JX/01株与CH/JX/01/P0、CH/JX/01/P5和CH/JX/01/P30以及从GenBank中下载的39株PEDV参考株全基因组、S基因和N基因进行的同源性分析,显示PEDV CH/JX/01株N基因与其他参考株的同源性相对较高,其中,与中国山东分离株SD2014（KX064280）、福建分离株XM1-2（KX812523）、河南分离株CH/HNZZ47/2016（KX981440）和广东分离株CH/GDZH02/1401（KR153325）的氨基酸同源性均为100%。2、PEDV N蛋白的原核表达及高免血清的制备与应用:使用特异性引物,成功扩增PEDV CH/JX/01株N基因,将目的条带与表达载体pcold I连接,构建重组质粒pcold-PEDV-N,将重组质粒转入大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,获得重组N蛋白表达菌,待OD600nm为0.4至0.6时,冰浴30min后向菌液中加入IPTG诱导剂使其终浓度为0.8mM,16℃诱导表达24h,得到大小约为58kD的重组N蛋白,SDS-PAGE以及Western blot结果显示目的蛋白能够以可溶性蛋白的形式存在,并且具有较好的的免疫原性。经过Ni层析柱纯化后获得重组PEDV N蛋白,并将其作为抗原免疫BALB/c小鼠,采集免疫后的小鼠血清,利用实验室建立的间接ELISA方法测定免疫后血清效价均高于1:25,600。通过间接ELISA、Western blot以及IFA检测方法,验证了鼠抗PEDV N蛋白高免血清对PEDV具有良好的反应性,表明表达的PEDV N蛋白可以用于PEDV检测。