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重症肌无力(myastheniagravis,MG)是一种主要累及神经肌肉接头处(neuromuscularjunction,NMJ)突触后膜(postsynaptic)上乙酰胆碱受体(acetylcholinereceptor,AchR),主要由乙酰胆碱受体抗体(acetylcholinereceptorantibody,AchRab)介导、细胞免疫(cell-mediatedimmunity,CMI)依赖性、补体(complement)参与的自身免疫性疾病(autoimmunedisease)。其特点包括:1.临床上表现为活动后加重、休息后减轻、朝轻暮重的骨骼肌无力。2.电生理上表现为低频重复电刺激波幅递减,微小终板电位降低、单纤维肌电图上颤抖增宽、甚至阻滞。3.药理学上表现为胆碱酯酶抑制剂治疗有效、对箭毒类药物的过度敏感性。4.免疫学上表现为血清乙酰胆碱受体抗体增高。5.免疫病理学上表现为神经肌肉接头处突触后膜的皱褶减少,变平坦,突触后膜上乙酰胆碱受体减少。重症肌无力是一种世界性疑难病,目前西医治疗方法均有不同程度的副作用,因此,发掘减少西药副作用且疗效确切的中成药成为当务之急。重肌灵片是导师吴以岭教授在奇经理论和络病学说指导下研制成功的治疗重症肌无力的纯中药制剂,在临床和实验研究中均取得了明显疗效。
目的:
从奇经理论和络病学说探讨重症肌无力的中医病理机制;观察重肌灵片治疗ⅡA型重症肌无力的临床疗效;观察重肌灵片对重症肌无力患者外周血T淋巴细胞亚群,细胞因子IFN-γ、IL-4及TGF-β水平,单个核细胞IFN-γ、IL-4及TGF-βmRNA转录水平的影响。
方法:
1总结历代文献关于痿证的论述,并结合现代医学对重症肌无力的研究进展,在奇经理论和络病学说指导下深入探讨重症肌无力的中医病理机制。
2根据入院先后,按照随机双盲对照原则,将符合纳入标准的重症肌无力患者随机分为治疗组和对照组,两组各30例。治疗组服用重肌灵片和强的松模拟片;对照组服用强的松片和重肌灵模拟片。90天为一疗程。观察治疗前后的临床疗效积分和中医证候积分变化、ELISE法检测血清中乙酰胆碱受体抗体的滴度、应用肌电图仪检测重复低频电刺激动作电位衰减百分率。
3应用流式细胞仪检测重肌灵片和强的松治疗前后的重症肌无力患者外周血T淋巴细胞亚群分布的变化情况。
4利用T细胞能在体外诱生细胞因子的特点,采用重肌灵片和强的松治疗前后重症肌无力患者外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclear,PBMNC),加特异性刺激T细胞增殖的抗原AchR体外诱生培养,应用双抗体夹心ELISA技术测定培养上清液中Th1类细胞因子IFN-γ、Th2类细胞因子IL-4和Th3类细胞因子TGF-β的水平。
5采用RT-PCR技术检测服用重肌灵片和强的松治疗的重症肌无力患者治疗前后外周血单个核细胞IFN-γ、IL-4及TGF-βmRNA转录水平。
结果:
1根据重症肌无力的临床表现,属于中医的痿证范畴。“奇阳亏虚,真元颓废”是本病发生的中医病机之本,“络气虚滞”是本病的主要病理环节,重肌灵片温理奇阳,温扶元阳,大补元气,温填真精,通畅络气,处方选药精当,配伍严谨。
2临床研究结果显示:重肌灵片对ⅡA型重症肌无力具有明显疗效。从临床疗效积分变化统计:治疗组有效率93.33%,对照组有效率96.67%,两组无明显差异,P>0.05;从中医证候积分变化统计:治疗组有效率93.33%,对照组有效率仅为56.67%,两组中医证候改善情况有显著差异,P<0.01,提示治疗组在中医证候改善方面明显优于对照组。研究还发现,对照组治疗后出现轻度肝功能异常、空腹血糖增高、股骨头坏死、向心性肥胖等副作用;而中药重肌灵片具有确切的治疗作用,且未发现任何毒副作用,明显优于对照组。
治疗前,两组患者血清中乙酰胆碱受体抗体的滴度和受检部位动作电位衰减百分率无显著差异,P>0.05。治疗后,两组各指标均有显著改善,P<0.01。但治疗前后两组组间差值比较无明显差异,P>0.05。提示治疗组和对照组在降低血清中乙酰胆碱受体抗体的滴度和受检部位动作电位衰减百分率方面具有相同的临床疗效。
3两组患者治疗前外周血CD3+、CD8+细胞百分率明显低于健康组,P<0.01,CD4+细胞百分率与健康组比较无明显差异,P>0.05,而CD4+/CD8+比值则显著高于健康组。两组患者治疗后CD3+细胞百分率均无明显变化,P>0.05;CD4+细胞百分率、CD4+/CD8+比值均有明显下降,P<0.05,与对照组比较治疗后CD4+细胞百分率无明显差异,而CD4+/CD8+有明显差异,P<0.05;治疗组治疗后CD8+细胞百分率明显增加,与治疗前比较有明显差异,P<0.05,而对照组治疗后CD8+细胞百分率无明显变化,P>0.05。提示重肌灵片能使重症肌无力患者体内T淋巴细胞亚群比例重新分布,可能通过抑制Th细胞增殖,促进Ts细胞活化,CD4+/CD8+比值降低,使重症肌无力异常的免疫应答过程得到纠正,最终抑制B细胞产生以乙酰胆碱受体抗体为主的自身抗体。
4治疗前两组患者外周血IFN-γ、IL-4及TGF-β水平均显著升高,P<0.01,两组组间比较无明显差异,P>0.05。治疗后治疗组IFN-γ、IL-4水平明显降低,与治疗前比较有显著差异,P<0.01;TGF-β水平明显升高,与治疗前比较有显著差异,P<0.01;而对照组IFN-γ、IL-4、TGF-β三者水平均明显降低,与治疗前比较有显著差异,P<0.01。两组患者治疗后IFN-γ、IL-4比较无明显差异,P>0.05,而TGF-β有显著差异,P<0.01。
5治疗前,两组患者外周血单个核细胞IFN-γ、IL-4及TGF-βmRNA转录水平无明显差异,P>0.05。治疗后,经重肌灵片治疗的重症肌无力患者IFN-γ、IL-4mRNA转录水平明显下降,TGF-βmRNA转录水平明显提高,与治疗前比较,有显著差异,P<0.01;而强的松治疗的重症肌无力患者IFN-γ、IL-4及TGF-βmRNA转录水平均明显下降,与治疗前比较,有显著差异,P<0.01。两组患者治疗后IFN-γ、IL-4mRNA转录水平无明显差异,P>0.05;而TGF-βmRNA转录水平有显著差异,P<0.01。
结论:
1在国内首先运用奇经理论与络病学说进行重症肌无力的治疗,指出“奇阳亏虚,真元颓废”是本病的病机之本,“络气虚滞”是其主要病理环节,确立“温理奇阳,扶元振颓,通畅络气”的治疗方法,制定重肌灵片组方,开辟了从奇经理论和络病学说治疗重症肌无力的新途径。
2重肌灵片能明显改善ⅡA型重症肌无力患者的临床症状和中医证候,降低重症肌无力患者血清中乙酰胆碱受体抗体滴度和受检部位动作电位衰减百分率;在中医证候改善方面明显优于强的松,而且无任何毒副作用。
3重肌灵片可能通过抑制Th细胞增殖,促进Ts细胞活化,降低CD4+/CD8+,使重症肌无力患者体内T淋巴细胞亚群比例重新分布,纠正重症肌无力异常的免疫应答过程,最终抑制B细胞产生以乙酰胆碱受体抗体为主的自身抗体。
4重肌灵片可明显增加重症肌无力患者外周血TGF-β及其单个核细胞中TGF-βmRNA转录水平,明显降低外周血IFN-γ和IL-4及其单个核细胞中IFN-γ和IL-4mRNA转录水平;而强的松对IFN-γ、IL-4、TGF-β及其mRNA转录水平均为抑制作用,显示了重肌灵片不同与西药免疫抑制剂的双向免疫调节作用。