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背景及目的： 心血管疾病(cardiovascular disease, CVD)是一种由多因素参与的复杂病理过程，严重危害着人类的健康。血管内皮损伤及其功能障碍是其发生和发展的重要基础，而内皮功能障碍的本质是内皮损伤和修复之间动态平衡的破坏。研究发现内皮祖细胞(endothelial progenitor cells, EPCs)能够促进受损血管的再内皮化，参与血管内皮损伤后的修复过程。EPCs是一类能增殖并分化为血管内皮细胞(endothelial cells，ECs)的前体细胞，根据EPCs在体外培养出现时间的先后和功能迥异特点分为早期 EPCs和晚期 EPCs。与早期 EPCs能分泌多种生长因子而体外成管及增殖能力较弱的特点相比，晚期EPCs增殖能力强，能直接参与血管生成，在内皮修复过程中起重要作用。尿苷腺苷四磷酸盐(uridine adenosine tetraphosphate，Up4A)在2005年首次被发现存在于人的血浆中，是一种在活体中首次发现具有嘌呤和嘧啶结构的、能够引起血管收缩的二核苷酸。Up4A不仅能促进人类平滑肌细胞的增殖和迁移，而且诱导活性氧和白细胞趋化因子的产生，参与炎症反应。在原发性青少年高血压患者中，血浆中Up4A的水平明显升高。因此，Up4A可能是CVD发生和发展的重要危险因素。目前国内外尚无有关Up4A对晚期EPCs影响的研究报道。我们首先从人脐血中分离和培养出晚期EPCs，然后观察Up4A对人脐血晚期EPCs功能的影响，并探讨Up4A对晚期EPCs的作用机制。 方法： 采用密度梯度离心法从人脐血获取单个核细胞，将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板，培养24h后，换液，1周内每日换液，然后每隔1-2日换液一次，直至细胞传代。并进行鉴定。采用MTT比色法、Transwell小室、粘附能力测定实验检测10-7、10-6、10-5mol/l Up4A及非选择性P2受体拮抗剂suramin对晚期EPCs的增殖、迁移和粘附的影响。采用Western-blot检测在10-7、10-6、10-5mol/l Up4A和在6h、12h、24h、36h、48h下Up4A对晚期EPCs中SIRT1表达。 结果： 从人脐血中分离的单个核细胞接种培养1-2周可出现克隆样的ECs团，并逐渐融合成鹅卵石样的单层细胞，传代后细胞形态保持不变。该细胞具有摄取DiI-acLDL和结合UEA-I并表达vWF能力。 随着浓度的升高, Up4A抑制晚期EPCs的增殖、迁移、粘附。Up4A对晚期EPCs功能的抑制作用呈一定的量效关系。Up4A对晚期EPCs功能抑制作用能部分地被非选择性的P2受体拮抗剂suramin阻断。随着Up4A浓度升高和干预的时间增加，Up4A抑制SIRT1在晚期EPCs中的表达，但suramin能部分地拮抗晚期EPCs中Up4A对SIRT1的抑制作用。 结论： 1.从脐血中能够分离和培养出晚期EPCs。 2. Up4A抑制晚期EPCs的增殖、迁移、粘附功能。 3. Up4A对晚期EPCs功能的抑制作用与P2嘌呤信号通路有关，P2非选择性受体拮抗剂suramin能部分地拮抗Up4A对晚期EPCs功能的抑制作用。 4. Up4A抑制晚期EPCs中SIRT1的表达，且suramin能部分拮抗Up4A对晚期EPCs中SIRT1的抑制作用。 5. Up4A可能通过SIRT1调节晚期EPCs功能。