产γ-氨基丁酸益生菌的筛选及对小鼠微生态效应的影响研究

来源 :四川农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kelong18433
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本研究为筛选具有生物拮抗活性和耐酸耐胆盐能力的高产γ-氨基丁酸(GABA)的益生菌菌株,并探讨其微生态效应。从待分离样品中筛选出可疑菌株,经纸层析和HPLC-MS进行定性和定量分析,筛选出一株高产GABA菌株;通过小鼠饲喂试验研究该高产GABA菌株对小鼠生长性能、血清抗氧化能力、免疫器官指数、脾淋巴细胞增殖、盲肠菌群以及空肠和十二指肠黏膜的影响。试验结果如下:1.通过细菌形态、生理生化特性并结合细菌16S rDNA序列分析对高产菌株进行鉴定,同时研究高产菌株对3种动物性病原菌的生物拮抗作用及其耐酸耐胆盐试验。结果,从泡菜中筛选出的菌株GA8为高产γ-氨基丁酸菌株,在含有1%L-谷氨酸钠的GYP培养基中37℃培养48 h,产GABA量达3.50 g-L-’,经鉴定该菌株为植物乳杆菌;该菌株全菌液和上清液对鸡源大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和鸡白痢沙门氏菌有一定的抑制作用,其菌体悬液无抑菌能力;该菌初始活菌数为108 CFU.mL-1时,在pH=2.0的酸性环境中处理4 h后活菌数能达到106CFU.mL-1以上;0.3%胆盐浓度处理4 h,活菌数达到103 CFU·mL-1左右。表明所筛选出的产γ-氨基丁酸菌株GA8具有一定的抑菌性能和耐酸能力,0.1%胆盐浓度下有较强的存活率。2.60只昆明系雌性小鼠随机分成5组,试验1、2、3组小鼠饮用水中分别添加含有1×106 CFU mL-1,2×106 CFU mL-1,4×106 CFU mL-1的产GABA植物乳杆菌GA8,对照组在饮用水和日粮中不添加任何制剂,GABA组在日粮中加入15 ppmGABA,小鼠饲喂30 d后,检测其生长性能、血清抗氧化能力、免疫器官指数、脾淋巴细胞增殖、盲肠菌群结构以及空肠和十二指肠黏膜结构。结果:(1)饲喂产GABA植物乳杆菌GA8后,试验1、2、3组、GABA组的末重分别比对照组提高了2.10%、0.86%、5.55%、4.48%,平均日增重分别提高了10.71%、7.14%、17.86%、10.71%,其中仅试验3组与对照组差异显著(P<0.05);试验1、2、3组、GABA组的料重比分别比对照组降低了6.93%、5.66%、11.10%、10.68%(P>0.05)。(2)与对照组相比,试验1、2、3组的总抗氧化能力(T-AOC)分别提高了6.04%、30.97%、31.11%,总超氧化物歧化分别提高了4.94%、6.13%、5.23%,丙二醛(MDA)分别降低了11.32%、9.16%、7.63%,但差异均不显著(P>0.05)。(3)试验1、2、3组小鼠盲肠大肠杆菌显著或极显著低于对照组和GABA组(P<0.05或P<0.01);试验1、2、3组、GABA组的乳杆菌比对照组分别增加了1.16%、0.91%、1.68%、0.52%,试验3组与对照组差异显著(P<0.05);试验1、2组的肠球菌显著低于对照组(P<0.05),试验2组显著低于GABA组(P<0.05);采用PCR-DGGE技术分析,试验1、2、3组和GABA组肠道菌群的多样性指数、均匀度和丰富度均高于对照组。(4)试验1、2、3组和GABA组的各免疫器官指数表现出了一定的优势,胸腺指数分别提高了19.25%、6.28%、16.74%、1.26%,试验1组与对照组、GABA组差异均显著(P<0.05),其余各组无明显差异;试验1、2、3组和GABA组的脾脏指数分别提高了10.71%、12.01%、10.39%、9.09%,各组间无明显差异(P>0.05)。(5)饲喂产GABA植物乳杆菌后小鼠脾淋巴细胞转化率增高,试验1、2、3组与对照组相比差异极显著(P<0.01);GABA组与对照组差异显著(P<0.05);试验1组与试验2组、GABA组差异显著(P<0.05);试验3组与GABA组差异极显著(P<0.01)。(6)十二指肠绒毛长度明显增加,试验1、2、3组、GABA组都与对照组差异极显著(P<0.01),其中试验1组与试验3组差异显著(P<0.05),试验3组与试验2组和GABA组差异极显著(P<0.01);十二指肠隐窝深度降低,但差异不明显(P>0.05);试验1、2、3组和GABA组的空肠绒毛长度明显增加,其中试验1组与对照组、试验2组和GABA组差异极显著(P<0.01),试验2组与对照组差异显著(P<0.05);空肠隐窝深度明显降低,试验3组与对照组差异极显著(P<0.01),试验2组和GABA组与对照组差异显著(P<0.05)。
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