【摘 要】
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原生质融合育种技术是近年来迅速发展起来的细胞工程育种新技术,它为利用野生种质资源、提高工作效率、缩短育种周期、扩大现有栽培种基因开辟了一条新途径,在食用菌育种中具有
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原生质融合育种技术是近年来迅速发展起来的细胞工程育种新技术,它为利用野生种质资源、提高工作效率、缩短育种周期、扩大现有栽培种基因开辟了一条新途径,在食用菌育种中具有其优越及开拓性,受到许多研究者的广泛关注。本试验分别筛选出杏鲍菇及秀珍菇作为亲本菌株,单亲灭活后利用PEG进行融合,最终获得一株融合子R1-16,通过分子标记证明R1-16具有双亲的特异条带,是真正的融合子,并对融合子进行了简单的遗传分析。主要研究结果如下:1亲本的选择本试验根据原生质体制备的难易程度及菌丝生长速度的快慢为指标,综合分析后最终确定pl.e0091及pl.g0001..1为原生质体融合的亲本菌株。2亲本菌株原生质体制备、再生及融合的最佳条件确定本试验从菌龄、菌丝培养方式、酶解温度、稳渗剂种类、再生培养基种类、融合剂浓度等方面进行研究,采用单因素试验和正交试验,确定了原生质体制备、再生及融合的最佳条件,并通过对融合过程的观察,直接证明了原生质体融合的客观性。3融合子的筛选本试验以锁状联合和高温灭活为标记,通过拮抗反应筛选得到一株融合子,经纯化后获得一株遗传稳定的融合子R1-16。4融合子鉴定拮抗试验表明融合子与双亲存在一定的遗传差异,经RAPD、SRAP、ISSR及SCAR分子标记技术证明融合子含有双亲遗传物质,聚类分析显示融合子与秀珍菇遗传差异很小,RFLP-ITS酶切结果显示融合子与秀珍菇的ITS完全一致,因此可认为融合子仍然是秀珍菇。5遗传分析对融合子R1-16部分单孢菌株进行分子标记试验,结果表明R1-16从亲本pl.e0001中获得的遗传物质在减数分裂形成单孢的过程中发生分离,R1-16特异的DNA片段也在单孢中出现了分离。
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