降香黄檀食叶害虫高毒力杀虫真菌菌株研究

来源 :中南林业科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lu_bright_zhang
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双线卷裙夜蛾(Plecoptera bilinealis)是珍贵树种降香黄檀的主要食叶害虫之一。几年来,海南地区降香黄檀人工林中双线卷裙夜蛾虫害爆发严重,有关对双线卷裙夜蛾的研究很少。为了寻找对双线卷裙夜蛾一种绿色无公害的防治方法,作者试图从海南降香黄檀人工林中的土壤或者僵虫尸中寻找一种能够对双线卷裙夜蛾有杀伤力的一种杀虫真菌。白僵菌(Beauveria bassiana(Bals.)Vuillemin)是具有广泛的寄主、强大的感染能力、容易传播、无污染的特点,是一种广域昆虫病原菌。本论文拟从降香黄檀林下土壤和林中僵死的害虫中分离筛选对降香黄檀食叶害虫有杀伤力的杀虫真菌,进行初步毒力研究;进一步紫外诱变筛选出毒力强、僵虫率高的杀虫真菌诱变株;杀虫真菌诱变菌株与市售产品菌株在形态、毒力、基因方面差异性分析。研究结果可为降香黄檀食叶害虫杀虫真菌开发利用及生物防治提供科学依据。主要研究结果如下:1.食叶害虫杀虫真菌的筛选鉴定与致病力测定从海南省8个地区土壤样品和死亡的虫样中筛选分离的菌株中,通过形态学的观察,筛选出9株与白僵菌菌落和孢子形态结构相似的菌株,再通过DNA测序比对,发现了两株与白僵菌的序列相似度高达99.8%以上的菌株:编号为HNCM-S-02和HNCM-S-07,均来自海南澄迈县澄迈林场降香黄檀林下土壤中。系统分析接菌3,5,7d的HNCM-S-02与HNCM-S-07对双线卷裙夜蛾幼虫的致死效果,对比3,5,7d不同天数两株菌的致病力强弱来看,在第七d时HNCM-S-02的累计死亡数达到最大值73.00+0.099b,而HNCM-S-07的累积死亡率仅达到 27.10+0.271b。HNCM-S-02 的 LT50为 4.627d,HNCM-S-07 的 LT50 为6.881d,HNCM-S-02第7d时的僵虫率为54%,而HNCM-S-07的僵虫率仅为16%。以上共同说明了白僵菌HNCM-S-02对双线卷裙夜蛾幼虫的杀伤力强于白僵菌HNCM-S-07。2.两株白僵菌的紫外诱变和筛选两株白僵菌通过紫外诱变后,通过校正死亡率和僵虫率的比较,从中筛选出了最优菌,白僵菌HNCM-S-02(UV30)累计死亡率达到83.33%,僵虫率达到73.33%,LT50为3.241d(7d)。通过光照实验各组菌株的产孢量对比分析可知:各菌株产孢量受光照影响不大。3.杀虫真菌诱变菌株与市售产品菌株对比①形态特征通过体式显微镜观察各菌株的菌落、孢子形态、菌丝形态,发现三株白僵菌菌落都呈呈圆形或类圆形,呈白色,中央略微内凹,基底部无色。分生孢子梗可多次直角分叉,聚集成团。分生孢子多呈球形聚集分布,直径约为2.00~2.1 5μm。三株白僵菌形态上并无大差异。②毒力通过各组不同浓度梯度的菌株的校正死亡率、僵虫率、LT50和LC50四个方面比较可以分析出,白僵菌HNCM-S-02(UV30)优于其他两株菌,校正死亡率达到92.12%,僵虫率达到82.22%,LT50为4.327d,LC50为6.194×107个/mL。各组菌株的校正死亡率、僵虫率、半致死时间都随着浓度的增加而变化。校正死亡率和僵虫率与孢子液浓度呈正相关,半致死时间随着孢子液浓度增加而缩短。③基因白僵菌A与白僵菌最优株HNCM-S-02UV30的亲缘关系较近,白僵菌D与白僵菌HNCM-S-07的亲缘关系较近,相对整体而言,4株白僵菌的亲缘关系十分接近,但致病力却有明显的差异,这侧面说明了,白僵菌对双线卷裙夜蛾幼虫的致病力与基因有关。
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