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背景与目的:神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的发现和培养成功,是20世纪末神经生物学领域内的重要进展之一。NSCs是一种具有自我更新能力的细胞,可增殖分化为中枢神经系统内的3种基本细胞:神经元细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞。因具有一定的自我更新和分化能力,从而在临床有广阔的应用前景。通过深入研究动物和人脑发育过程中神经细胞的增殖、分化机制,以及在成年动物和人脑内神经干细胞的生长影响因素,发现多种细胞因子对不同年龄阶段脑内神经干细胞增殖、分化有促进作用。神经因子在神经干细胞的增殖、分化和存活过程中起重要作用,神经营养因子(neurotrophic factor)是其中的一类。神经生长因子(neural growth factor,NGF)作为第一个被发现的神经营养因子,是神经系统最重要的生物活性分子之一,是神经系统维持正常发育和功能的必要因素。NGF能促进发育中的感觉神经元和交感神经元的存活及分化,参与损伤神经再生和功能修复,并且参与维系神经、免疫和内分泌系统之间的平衡。本实验通过免疫细胞化学、流式细胞检测等方法,研究NGF对体外培养的神经干细胞增殖、分化和调亡的影响,探讨NGF在神经干细胞生长中的作用,为临床应用神经干细胞治疗神经系统疾病提供新的用药策略。 材料与方法:应用机械法分离人胚组织脑室区/脑室下区(ventricular zone/subventricular zone,VZ/SVZ)细胞,用无血清培养液对NSCs进行培养。待NSCs形成神经干细胞球(neurospheres)后,以不同浓度酵素-Ⅱ(dispase Ⅱ)分别消化神经干细胞球,观察消化过程和消化后细胞生长情况,以期确定能有效分散神经球的最佳Dispase Ⅱ浓度。以试验所得特定浓度Dispase Ⅱ来消化神经干细胞球,收集单个神经干细胞备用。用无血清培养基调制上述分离备用的神经干