论文部分内容阅读
目的通过对骨性关节炎(OA)患者关节软骨细胞半胱氨酸-天冬氨酸-特异性蛋白酶8(Caspase-8)基因启动子区非甲基化状态及Caspase-8蛋白表达的检测,探讨Caspase-8基因启动子区低甲基化在OA发生、发展中的作用。方法采用亚硫酸氢钠(Sodium-Bisulfite)方法处理基因组DNA,甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)方法检测Caspase-8基因启动子区非甲基化情况,免疫组化方法检测Caspase-8蛋白表达。实验分为两组：对照组14例和OA患者组35例,均为中南大学湘雅二医院住院病人。采用SPSS17.0统计分析软件进行分析,行X2检验或Fisher’s确切概率法检验和Spearman等级相关分析。结果1.OA患者与健康人软骨细胞Caspase-8启动子区非甲基化状态比较OA患者组与健康人对照组软骨细胞Caspase-8启动子区非甲基化阳性率分别为71.4%(25／35)和35.7%(5／14),经X2检验,两组间差异有统计学意义(X2=5.373,P=0.020)。2.OA患者与健康人软骨细胞Caspase-8蛋白表达比较14例健康人对照组软骨细胞Caspase-8蛋白有1例表达,而35例OA患者软骨细胞有13例Caspase-8蛋白表达,经X2检验,OA患者组软骨细胞Caspase-8蛋白与健康人对照组比较,差异有显著性意义(X2=4.410,P=0.036)。3.OA患者软骨细胞Caspase-8基因启动子区非甲基化水平与蛋白表达相关分析25例Caspase-8基因启动子区非甲基化阳性的OA患者中,有12例蛋白表达阳性；而13例Caspase-8蛋白表达阳性的OA患者中,有12例Caspase-8基因启动子区非甲基化阳性,经Spearman等级相关分析,Caspase-8基因启动子区非甲基化水平与蛋白表达呈显著正相关(rs=0.355,P=0.036)。结论OA患者和健康人对照组的关节软骨细胞Caspase-8基因启动子区均发生了去甲基化,而OA患者关节软骨细胞Caspase-8基因启动子区非甲基化水平明显高于健康人对照组。提示caspase-8基因的低甲基化状态促使Caspase-8蛋白表达水平上调,可能参与了OA的发生发展。