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目的：肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma HCC)是肝脏最常见的原发性肿瘤,是全球六大恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率显著增长。因此加强对HCC的基础研究显得极为重要。以往研究发现维甲酸/干扰素联合应用诱导细胞凋亡相关的基因(gene associated with retinoid-interferon-induced mortality19,GRIM一19)是一种肿瘤抑制基因,在多种恶性肿瘤中的表达水平较低,并且其蛋白表达与细胞凋亡和细胞生长抑制有密切的联系。本次实验我们主要研究的目的是通过检测(?)GRIM-19mRNA在肝细胞肝癌的表达,分析其与临床病理分期的联系,并进一步通过构建GRIM-19kd和scr的细胞株HL-7701和Huh-7研究GRIM-19对HCC细胞迁移能力的影响。方法：1.应用实时定量聚合酶连反应技术研究GRIM-19mRNA在83例肝细胞肝癌及其癌旁肝组织和8例正常组织的表达情况,并分析其与临床病理的联系；2.设计GRIM-19的敲除和对照序列,通过Transl-T1Phage Resistant化学感受态细菌,LA固体培养基筛选挑选阳性重组子。挑选好的阳性重组子通过LA液体培养基获得大量包含GRIM-19质粒的细菌,通过质粒小提试剂盒获得GRIM-19kd和scr的质粒。3.培养低侵袭力细胞株HL-7701、MHCC97-L和高侵袭力细胞株MHCC97-H、Huh-7,并通过Western Blot检测GRIM-19蛋白在上述细胞株的表达。通过细胞转染技术将GRIM-19kd和scr质粒转染至HL-7701和Huh-7,用G-418进行筛选,从而构建GRIM-19kd和scr细胞株并用Western Blot检测是否构建成功。4.通过Transwell小室检测HL-7701kd和scr、Huh-7kd和scr迁移能力,并用苏木精染色方法检测细胞数目,从而了解GRIM-19对HCC细胞迁移能力的影响。结果：山东大学硕士学位论文(1)实时定量聚合酶链反应技术结果示：肝细胞肝癌癌组织中GRIM-19mRNA表达低于与其相对癌旁肝组织中表达的共有52例,其阳性表达率为62.65%,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。肝细胞肝癌癌组织中GRIM-19mRNA表达同正常肝组织相比,肝细胞肝癌的GRIM-19mRNA平均表达水平为,明显低于GRIM-19mRNA在正常肝组织中的表达,差异有明显性(P<0.005)(2) GRIM-19mRNA的表达与肝癌临床病理相关性研究显示：GRIM-19mRNA与肝细胞肝癌临床TMN分期(P=0.011)、包膜浸润(P=0.047)、微血管入侵(P=0.030)密切相关。从而提示GRI M-19的同HCC的细胞迁移存一定在的联系。(3) Western Blot结果显示正常肝细胞株HL-7701,肝细胞肝癌细胞株MHCC97-L、MHCC-97H和Huh-7均表达GRIM-19蛋白,且低侵袭力HL-7701和MHCC97-L中GRIM-19蛋白的表达高于MHCC97-H和Huh-7。(4) Western Blot结果显示HL-7701kd细胞中GRIM-19蛋白的表达低于scr; Huh-7kd细胞中GRIM-19蛋白的表达低于scr,从而显示GRIM-19的敲除细胞株构建成功。(5) Transwell小室结果显示同scr相比,HL-7701kd细胞数增加了,而Huh-7kd的细胞数增加了,差异有明显差异(P<0.05)。结论：1.GRIM-19mRNA在肝细胞肝癌组织的表达明显低于相对应得癌旁肝组织和正常组织,说明GRIM-19mRNA在肝细胞肝癌中表达水平下调,并且GRIM-19mRNA低表达同肝细胞肝癌的临床TMN分期、包膜浸润和微血管入侵有密切的相关性。2. GRIM-19与HCC细胞的迁移能力密切相关,其低表达促进了HCC细胞得迁移能力,从而可能导致肿瘤的远处转移和扩散。3. GRIM-19与HCC的发生发展及远处转移有着密切的联系,其调控及作用机制的研究可为肝癌的诊断及治疗提供新的思路和治疗靶点。