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背景每年全世界肺癌新发病例大约1200000,其中80%为非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer, NSCLC),而且大多数诊断时已处晚期。近20余年来,针对晚期NSCLC的个体化治疗方法不断发展,相应针对肺癌的靶向药物种类也不断增加,最具代表性的是针对肺癌EGFR、ALK等驱动基因改变带来的精准治疗增加。肺癌表皮因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR)突变的发现及随后发展表皮生长因子受体络氨酸激酶抑制剂(Epidermal Growth Factor Receptor-Tyrosine Kinase Inhibitors,GRFR-TKIs)在延长EGFR突变人群的生存期的同时也极大的改善患者生活质量,其与临床的相关性已经得到很好认证。EGFR-TKIs药物的作用机制是通过EGFR酪氨酸磷酸化来组织丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases, MAPKs)信号转导通路的启动,终止肿瘤细胞生长,随着EGFR基因突变检测的逐渐普及和EGFR-TKIs药物如吉非替尼、厄罗替尼在临床的广泛使用,临床观察发现,虽然有部分患者存在EGFR基因突变,但对EGFR-TKIs的治疗效果并不满意。研究证实,这可能与RAS-RAF-丝裂原激活蛋白激酶的激酶(mitogen-activated protein kinase kinase,MEK)一细胞外信号调节激酶(extracel-lular-signal-regulated kinase,ERK)信号传导系统的下游信号因子KRAS(Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog,鼠类肉瘤病毒癌基因同源基因)或BRAF(V-rafmurine sarcoma viral oncogene homologBl,鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1)基因突变部分相关。在NSCLC中,EGFR信号途径最常检测到的就是KRAS突变,其在NSCLC患者中的发生率约为20-30%,主要为吸烟者和腺癌病人。最近,最新的数据显示KRAS突变是NSCLC患者预后不良的指标,而且与NSCLC患者对EGFR-TKIs靶向药物的原发性耐药有关,部分KRAS基因野生型的NSCLC患者也会对EGFR-TKIs产生耐药性,这主要是由于BRAF基因存在突变而导致,这就意味着是否给予患者行EGFR-TKIs治疗仅仅检测JEGFR基因突变可能是不够的；因此在行EGFR基因突变检测同时需行KRAS和BRAF基因检测。目的建立针对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)患者组织标本鼠类肉瘤病毒癌基因同源基因(Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog, KRAS)和鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1驱动基因(V-rafmurine sarcoma viral oncogene homologBl,BRAF)突变的特异引物双扩增实时蝎形探针扩增阻滞突变系统(sARMS-PCR)检测方法。了解NSCLC患者出现KRAS和BRAF突变的临床、病理特征,为临床治疗药物选择提供依据；探讨是否存在多驱动基因突变,为EGFR靶向药物选择提供依据;方法总共收集我院2013年1月～2013年12月经胸外科手术后或穿刺标本89例,病理均确诊为非小细胞肺癌,系肿瘤组织甲醛固定石蜡包埋标本(Formalin-fixed paraffin-embedded,FFPE),采用FFPE样品DNA分离试剂盒(离心柱型,Amoy Diagnostics, Xiamen, China)提取DNA,使用sARMS-PCR检测方法(厦门艾德生物医药科技有限公司)检测KRAS和BRAF基因突变。结果89例非小细胞肺癌患者手术或穿刺FFPE标本中,检出KRAS基因突变21例(21/89),突变率23.6%；其中KRAS基因7种热点突变中,检出6种热点突变,常见的突变区域集中在G12区：G12A与G12D检出6例,G12C检出5例均为高发区,而G12V只与G12D或G12C各联合出现1例,未见单独存在,G13区仅有G13D存在。KRAS基因突变好发于男性,男性检出率为31.5%(17/54),女性检出率为12.9%(4/31),两者比较具有明显差异(P=0.030)。BRAF基因突变1例(1/89),突变率1.12%,突变位点为V600E,为女性、粘液腺癌；同一患者标本中未见KRAS和BRAF基因同时突变现象。结论利用sARMS-PCR技术针对NSCLC患者组织学标本KRAS、BRAF突变进行检测,该方法有取材方便,检测稳定可靠的优点；KRAS基因突变与性别有相关性(p<0.05)；与年龄,临床分期,吸烟等临床病例特征无明显相关性(p>0.05);BRAF基因突变因例数太少未能观察与性别,年龄,吸烟及分期的相关性。以早期为主的标本中(73/89,82.0%)同一患者标本中只发现KRAS存在复合突变(G12V与G12D或G12C-突变),未见与BRAF同时双突变现象。