论文部分内容阅读
背景: 肝细胞癌(HCC)是全球第五位常见恶性肿瘤,每年约有626,000例新发患者。在中国和南亚HCC的发生与乙型肝炎病毒感染和肝硬化密切相关.近些年随着外科技术和诊断方法的不断进步,HCC病人的预后已经明显改善,但是病人的长期生存率及生存质量仍不十分乐观,影响长期预后的主要原因是术后较高的复发和远处转移(五年复发率为50-70%)。 MiRNA是新近发现的在恶性肿瘤中起重要作用的热点基因,mir-372在多种恶性肿瘤起重要作用,而且其作用机制复杂多样。在HCC中mir-372的表达水平及其具体作用仍不十分明确存在争议,故急需进一步研究。 方法: 采用Real Time-PCR的方法检测90例肝癌患者Mir-372的表达水平;采用生物信息学预测网站分析发现Mir-372基因启动子上游存在CpG岛,采用甲基化特异性PCR(MSP)的方法检测Mir-372上游启动子水平存在高甲基化状态。使用MiR-372 UpTM agomir和MiR-372 DownTM antagomir分别上调HUH7和HCCLM3细胞中Mir-372表达后,检测细胞周期、增殖能力、侵袭能力的变化。 结果: 在90例病人中,59例(65.6%) Mir-372在肿瘤组织中的表达水平低于其相应癌旁组织,肝癌组织的平均表达水平明显低于癌旁组织(3.35±2.31 vs.4.68±3.63,P=0.003)。MSP结果显示在HUH7,HCCLM3,QGY7701,PLC5细胞中Mir-372启动子高甲基化,在Smmc7721和HepG2细胞中部分甲基化,在正常肝细胞LO2中未甲基化;肝癌组织中,高甲基化占62%(31/50),癌旁组织中高甲基化占22.9%(11/48)。使用甲基化转移酶抑制剂(5-aza-dCyd)处理HUH7和HCCLM3两株肝癌细胞能够使Mir-372表达上调。使用Mir-372 agomir转染HUH7和HCCLM3细胞上调Mir-372表达后,采用侵袭试验,平板克隆试验和流式细胞分析检测细胞功能后,表明Mir-372能够通过影响细胞侵袭和增殖能力发挥抑癌作用。 结论: Mir-372在肝细胞癌的低表达是由于其上游启动子高甲基化状态所致,并且Mir-372抑制肝癌细胞的增殖侵袭能力,起抑癌作用。