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目的藏药吉堪明目液(Jikan Mingmu drops,JMD)最早记载于藏医典籍《四部医典》中,具有消炎止痛的功效,可改善眼部炎症和视力相关症状,藏医常用来治疗糖尿病干眼症(diabetes mellitus-induced dry eye syndromes,DM-DES)。但是,JMD对DM-DES的保护作用和分子机制尚不明确。因此,本研究旨在观察JMD是否通过抑制炎症相关因子及调控丝裂原活化的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路,改善DM-DES症状。方法SPF级8周龄db/db小鼠50只,雄性。小鼠随机分笼饲养,自由进食进水1周,记录小鼠的活动和饮水进食状况。1周后,小鼠每只眼给予0.2%苯扎氯铵5μL,每天两次,连续给药7 d,观察每只小鼠的行为活动、饮水进食量以及小鼠眼部的变化情况。以泪液分泌量及角膜荧光素钠染色得分≥12判断DM-DES模型是否复制成功。将DM-DES模型成功小鼠随机分成5组:模型组(Model),泪然组(dextran and hypromellose eye drops,DHED),吉堪明目液低剂量组(0.25g/mL JMD),吉堪明目液中剂量组(0.5 g/mL JMD)和吉堪明目液高剂量组(1g/mL JMD),每组8只。另将8只db/db小鼠作为空白对照组(Control)。Control组和模型组给予JMD溶媒滴眼,每次滴眼5μL,每日3次,连续给药7 d。末次给药2 h后,脱颈处死,收集眼球组织。1.泪液体积的检测:给予JMD的第1、3、5、7 d测量小鼠泪液分泌量的变化。2.角膜荧光素钠染色:给予JMD的第7 d测量小鼠角膜损伤情况。3.结膜组织病理学检查:苏木精-伊红染色(hematoxylin and eosin staining,HE)检测小鼠结膜组织损伤情况;过碘酸·希夫染色(periodic acid–Schiff staining,PAS)检测小鼠结膜杯状细胞形态学和数量的变化。4.结膜组织中炎症因子检测:生物化学法(Elisa)检测小鼠结膜结膜中白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-17α、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的含量。5.结膜中MAPK信号通路蛋白的检测:免疫印迹法(Western Blot)检测结膜组织中p38,p-p38,ERK1/2,p-ERK1/2,JNK1/2,p-JNK1/2蛋白的表达。6.JMD物质基础初步研究:高效液相色谱(high-performance liquid chromatography,HPLC)法和气相-质谱(gas chromatography–mass spectrometry,GC-MS)法检测JMD中羟基红花黄色素A、盐酸小檗碱和没食子酸等13种主要化学成分的含量。结果1.共40只小鼠符合干眼症临床标准,每组8只。2.与模型组相比,JMD低剂量和中剂量组在给药第3 d泪液分泌量升高,但数据并无统计意义(p>0.05),JMD高剂量组泪液分泌量有统计学意义(p<0.05),给药7 d后,JMD低、中、高剂量组泪液分泌量显著增加,其数据具有统计学意义(p<0.05)。3.与模型组相比,给予JMD 7 d后,JMD低、中、高剂量组角膜荧光钠染色评分显著降低降低(p<0.05)。4.HE结果显示,空白对照组粘膜上皮细胞排列整齐;同时黏膜下组织排列整齐,结构致密,未见炎性细胞浸润。模型组粘膜层较厚,上皮细胞数量略有增加。此外,粘膜下细胞数量增多,排列不规则,粘膜下组织较宽,细胞核收缩,伴有一定程度的细胞坏死。上述模型组结膜上皮细胞的所有组织病理学变化在JMD治疗组中均明显改善。PAS染色结果显示,JMD中、高剂量组可增加结膜杯状细胞的数量。5.与模型组相比,JMD组能明显降低结膜IL-6、IL-17α、IL-1β、TNF-α、VEGF炎症因子的表达水平(p<0.05)。6.与模型组相比,JMD中、高剂量组能显著降低p-p38和p-JNK的蛋白表达水平(p<0.05或p<0.01);JMD对p-ERK具有一定的抑制作用,但无统计学意义(p>0.05)。7.HPLC法分析结果显示,JMD中主要含有羟基红花黄色素A(40.9273μg/m L)、木兰花素(2.4374 mg/mL)、盐酸黄连碱(0.1717 mg/mL)、盐酸巴马汀(48.2191μg/mL)、盐酸小檗碱(0.3569 mg/mL)、没食子酸(13.8830 mg/mL)、鞣花酸(7.0387 mg/mL)、牛磺熊去氧胆酸(0.0208μg/mL);GC-MS法分析结果显示,JMD中含有樟脑(0.0202 mg/ml)、异龙脑(0.481 mg/ml)、龙脑(0.283 mg/ml)、反式肉桂酸(0.227 mg/ml)和麝香酮(0.038 mg/ml)。结论1.db/db小鼠连续滴眼0.2%苯扎氯铵7天可建立稳定的DM-DES模型。2.JMD对小鼠糖尿病干眼症的治疗效果呈剂量依赖性。3.JMD对DM-DES的保护作用可能与抑制相关炎症因子相关,其作用机制可能与抑制MAPK信号通路有关。