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TLRs是天然免疫应答中一类高度保守的模式识别受体。通过识别病原体相关的分子模式,TLRs活化后促进免疫细胞分泌促炎性细胞因子和Ⅰ型干扰素,从而清除病原微生物的感染。Rab5a是Rabs家族的一个主要成员,定位于质膜、早期内体和网格蛋白覆盖的囊泡。它负责调控早期内体与胞吞泡融合,是早期胞吞途径的一个主要限速成分。有研究发现,Rab5a不但参与了细胞内物质运输和蛋白分选,还参与了信号转导。Rab5a如何调控TLRs信号转导尚未见报道。目的:研究Rab5a在巨噬细胞RAW264.7中对TLR3和TLR4信号转导途径的作用。方法:通过脂质体法将Rab5a及其突变体Rab5aN133I的真核表达载体转染到RAW264.7细胞中,G418选择性培养基进行筛选,建立稳定表达Rab5a和Rab5aN133I的细胞系。通过RT PCR和Realtime PCR和Western Blot方法鉴定稳定表达细胞系。MTT法分析其生长特性,LPS和polyI:C刺激巨噬细胞系不同时间,检测iNOS、TNF α和IL6的表达水平的变化。结果:转染Rab5a/Rab5aN133I细胞Rab5a mRNA水平显著高于对照(p<0.05)。Rab5a的过表达促进RAW264.7细胞增殖,而过表达Rab5aN133I细胞增殖显著慢于对照细胞(p<0.05)。Rab5a过表达显著促进了LPS/polyI:C活化的RAW264.7细胞中iNOS、TNF α和IL6的表达(p<0.01)。而Rab5aN133I过表达后上述细胞因子的分泌均有所恢复。结论:Rab5a促进了LPS/polyI:C诱导的巨噬细胞RAW264.7细胞中iNOS、TNF α和IL6的表达,这种促进作用依赖于其结合GTP的能力。Rab5a可能是TLR3/TLR4信号通路的正向调控蛋白。本研究为进一步了解Rab5a蛋白在TLR3/TLR4信号转导中的作用奠定了基础。