论文部分内容阅读
论文的第一章研究了三联吡啶钌的N-羟基琥珀酰亚胺酯（Ru（bpy）2（dcbpy）NHS）修饰磁球的构建及其电化学发光（ECL）。首先合成了Ru（bpy）2（dcbpy）NHS并用红外光谱，紫外光谱，荧光光谱等方法对其进行了表征。然后利用线性扫描伏安法对Ru（bpy）2（dcbpy）NHS进行了ECL检测，ECL曲线的峰电位为1．25 V。采集到Ru（bpy）2（dcbpy）NHS ECL的光谱图，峰值在672 nm处。其ECL强度与同浓度的Ru（bpy）3Cl2溶液的ECL强度相当。然后构建了Ru（bpy）2（dcbpy）NHS修饰的生物素包被的磁球（Bio-磁球）及链霉亲和素包被的磁球（SA-磁球）。利用Ru（bpy）2（dcbpy）NHS上的酰基与链霉亲和素（SA）上的氨基发生偶联发应形成酰胺键，得到SA修饰的Ru（bpy）2（dcbpy）NHS（Ru（bpy）2（dcbpy）NHS-SA）。利用生物素与SA的特异性反应，将Bio-磁球与Ru（bpy）2（dcbpy）NHS-SA连接在一起，得到Ru（bpy）2（dcbpy）NHS修饰的Bio-磁球。Ru（bpy）2（dcbpy）NHS修饰SA-磁球的构建利用了磁球上SA的伯胺与Ru（bpy）2（dcbpy）NHS上的酯基反应形成酰胺键使Ru（bpy）2（dcbpy）NHS直接与磁球结合。结果表明，Ru（bpy）2（dcbpy）NHS修饰的这两种磁球可以产生较强的ECL。论文的第二章提出了一种新的提高电化学发光免疫分析（ECLIA）灵敏度的方法：基于磁球放大技术的ECLIA方法。在此方法中，我们利用小鼠抗人CA125抗体上的氨基与硅烷化基底上的环氧基的反应将小鼠抗人CA125抗体固定在基底表面。经双抗夹心免疫反应，生物素与SA的特异性反应等形成磁球-抗体-目标抗原-抗体夹心复合体，然后将过量Ru（bpy）2（dcbpy）NHS-SA与固定在基底上的磁球复合体进行反应，形成了Ru（bpy）2（dcbpy）NHS标记的磁球复合体，然后进行ECL检测。由于一个磁球上结合了大量的Ru（bpy）2（dcbpy）NHS，提高了电化学发光效率，从而提高了方法的灵敏度。本章还优化了实验条件（如BSA封闭时间，抗原抗体孵育浓度及孵育时间等）。在最佳条件下，实现了对人卵巢癌抗原CA125的定量测定，该方法的线性浓度范围为5．00×10-9mol／L～1．00×10-7mol／L。