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Luman募集因子（Luman Recruting Factor, LRF）是近年来发现的一个转录因子，目前的研究主要集中于其分子结构的研究，但其在雌性哺乳动物生殖过程中的作用鲜有报道。前期基因敲除鼠实验证明：LRF基因与小鼠的生殖相关，LRF基因敲除雌鼠无论与野生型雄鼠或杂合子雄鼠合笼后，均可产生后代，但产仔数降低，纯合子基因敲除雌鼠的母性变差；与基因敲除的雄鼠交配则不育。基因敲除雌鼠妊娠期促乳素（PRL）、糖皮质激素和催产素的分泌范型发生显著变化。提示LRF在小鼠生殖中的作用，但其作用的机制和影响生殖的环节与时期则不清楚。本实验应用实时荧光定量PCR、免疫组织化学和Western blot等方法检测了LRF在雌性小鼠生殖组织中的时空性表达，主要检测了LRF在发情周期中不同阶段的卵巢、输卵管和子宫中的表达；LRF在小鼠卵泡发生及植入前胚胎发育过程中的时空性表达；LRF在围植入期子宫中的时空性表达，在假孕、延迟着床和着床激活、人工诱导蜕膜化及类固醇激素处理的小鼠子宫模型中的表达。进而揭示LRF对小鼠卵子发生及植入前胚胎发育、胚胎植入的调节作用。此外，研究了LRF介导的ERS在小鼠卵巢颗粒细胞凋亡过程中的作用。1.构建GST-LRF-N端原核表达载体，最佳表达条件优化后，亲和层析方法纯化得到GST-LRF-N端融合蛋白并免疫兔子和小鼠获得了抗血清；通过优化GST-LRF表达条件，应用切胶及反复冻融方法获得了GST-LRF融合蛋白，免疫小鼠获得了抗血清。以上两种方法获得的抗血清经Western blot鉴定特异性较强，适合用于进行后续实验。2.应用实时荧光定量PCR、免疫组织化学技术和Western blot方法研究LRF在小鼠发情周期中不同阶段的卵巢、输卵管和子宫中的时空性表达。LRF在发情周期卵巢、输卵管和子宫中有明显的变化规律。LRF在发情前期和发情期的表达最低，而在间情期表达水平最高；在各个时期的输卵管壶腹部和峡部，子宫腺上皮和腔上皮都检测到了LRF蛋白。提示LRF可能在雌性小鼠生殖过程中具有重要的作用，且LRF的规律性变化可能与类固醇激素的周期性变化相关。3.应用实时荧光定量PCR、免疫荧光细胞化学方法研究LRF在植入前胚胎中的表达。在受精卵、2-cell、4-cell、8-cell、桑葚胚和囊胚中都检测到了LRF mRNA和LRF蛋白。而LRF mRNA和LRF蛋白在囊胚期显著地增加，且在滋养外胚层和内细胞团都检测到LRF蛋白，提示LRF可能参与胚胎发育和分化，以及胚胎植入过程。免疫组织化学方法检测了LRF在卵泡中的表达，从原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡、三级卵泡和成熟卵泡中都检测到了LRF蛋白，LRF主要定位于卵母细胞和卵巢颗粒细胞。这些结果提示LRF可能参与卵母细胞的生长、发育、成熟及排卵等过程，此外可能对颗粒细胞的增殖与分化也起着重要的作用。4.应用实时荧光定量PCR、免疫组织化学技术和相关的实验小鼠模型研究LRF在围植入期妊娠小鼠子宫、假孕小鼠子宫、延迟着床和着床激活小鼠子宫、人工诱导蜕膜化小鼠子宫、类固醇激素处理的小鼠子宫中的表达。LRF mRNA显著性地在妊娠第5d附植窗口期子宫增加，LRF蛋白在妊娠第5d附植窗口期的子宫内膜胚胎附植位点、腺体高表达，与妊娠1-4d的妊娠子宫相比，基质细胞中LRF蛋白表达显著地增加，提示LRF参与胚胎附植过程。胚胎着床激活子宫LRF mRNA显著高于对照组，LRF蛋白高表达于胚胎着床激活子宫附植位点和腺体，结合假孕实验小鼠模型结果，说明活化的胚胎参与激活子宫容受性，进而参与胚胎附植。LRF mRNA在妊娠第6、7d显著增加，LRF高表达于妊娠第6d的初级蜕膜区（PDZ），第7d的次级蜕膜区（SDZ）。诱导蜕膜化子宫LRF mRNA显著地高于未诱导的子宫，LRF蛋白微弱地表达于未诱导的子宫腔上皮，而诱导的蜕膜化子宫出现许多的蜕膜化细胞，并高表达LRF蛋白。提示LRF参与蜕膜化过程。与对照子宫相对比，激素诱导的子宫LRF mRNA发生明显的变化，在外源激素未处理的对照子宫腔上皮只能检测到微弱的LRF蛋白，在P4和E2+P4处理的子宫腔上皮、腺上皮及间质细胞都能检测到LRF蛋白，在E2处理的子宫腔上皮、腺上皮能检测到LRF蛋白。提示LRF受到E2、P4的调节。5.体外培养小鼠卵巢颗粒细胞并应用ERS诱导剂毒胡萝卜素（Tg）和衣霉素（Tm）诱导小鼠卵巢颗粒细胞ERS模型，应用免疫组织化学技术、激光共聚焦成像技术、实时荧光定量PCR，流式细胞术等研究LRF介导的ERS在小鼠卵巢颗粒细胞凋亡过程中的作用。在凋亡的卵巢颗粒细胞中检测到LRF蛋白，且LRF蛋白和促凋亡蛋白CHOP、Caspase-12在凋亡的卵巢颗粒细胞共定位；ERS相关的基因随着凋亡率的升高而规律性的变化。结果提示：LRF介导的ERS参与调节小鼠卵巢颗粒细胞的凋亡。