论文部分内容阅读
子宫内膜癌为女性生殖道常见的恶性肿瘤之一，发病率占女性生殖道恶性肿瘤的第二位。近年来，子宫内膜癌的发病率呈世界性的持续上升趋势。子宫内膜癌的发病因素目前尚无确切的定论，大量的流行学调查发现子宫内膜癌的发病和一些危险因素有关，其中肥胖，即脂肪的过度堆积和糖尿病是两个较为重要的因素。探讨肥胖以及胰岛素抵抗性的机理已成为近年来研究子宫内膜癌的热点。在脂肪和胰岛素抵抗的形成过程中，有两类转录因子发挥了重要作用。一类是过氧化物酶增殖激动受体(PPARs)，属于核酸激素受体超家族。另一类是CCAAT增强子结合蛋白家族(C／EBPs)，属于亮氨酸转录因子超家族。在本试验中，着重探讨了脂肪和胰岛素抵抗形成的基础原理。本课题中运用了PPARγ的拮抗体(AGX0104)来阻止PPARγ的活性，以此来分析PPARγ在脂肪形成和胰岛素抵抗形成的作用。发现：没有PPARγ的活性，就没有C／EBPα的表达和脂肪颗粒的形成。提示：C／EBPα的表达依赖于PPARγ的表达，PPARγ和C／EBPα是影响脂肪形成和胰岛素抵抗的重要因素。为了探讨C／EBP家族中的另一重要成员C／EBPβ在脂肪形成和胰岛素抵抗中的地位，利用鼠脂肪前细胞外源性表达C／EBPβ，发现常规诱导后，这种细胞可以有PPARγ的表达，并有脂肪颗粒的形成，但无C／EBPα的表达和胰岛素的敏感性。加入PPARγ的受体后，C／EBPα开始表达，并表现有胰岛素的敏感性。提示：胰岛素的敏感性和C／EBPα的表达息息相关。任何可以影响C／EBPβ，C／EBPα，PPAγ的因子都可作为影响肥胖和胰岛素抵抗的因素。AGX0104可以完全阻断PPARγ的合成，继而有效的阻断脂肪郑州大学2003年硕士毕业论文AGX0104抑制脂肪生成机理的研究细胞的形成。AGX0104具有毒性低，特异性高的特点，为预防肥胖和子宫内膜癌的发生提供了理论依据。如果能开发应用于临床，可为临床防治子宫内膜癌提供一个崭新的前景。材料与方法: 1.转化质粒的制备。 2.质粒扩增。 3.质粒转染，制备稳定表达C尼BPp的细胞系。 4.脂肪前细胞向脂肪细胞分化的过程中，应用蛋白质聚丙烯胺凝胶电泳检测PPA助，e尼BPp，e尼Bpa，Adiponeetin，perilipin的表达。结果: 1.在3T3一Ll脂肪前细胞向成熟脂肪细胞的分化过程中，诱导后第二天，第三天，第四天分别运用PPA砌拮抗体(AGX0104，10uM)检测PPARY和C尼BPa蛋白表达水平，以及Adiponectin以及periliPin(成熟脂肪细胞的标志)蛋白水平的表达，发现在诱导后的第二天，可以清楚的看到PPARY被彻底阻断。诱导后的第四天，C尼BPa的表达被部分阻断，说明C尼BPa的表达可能部分的被其他的因子所调控。也可能是时间过短。AdiPonectin这一胰岛素敏感指标在短短的一天内也被完全阻断。脂肪颗粒多少标志的指标:PeriliPin(特异性的在脂肪颗粒表面表达的蛋白)也在短短的24小时被完全阻断。而C尼BPp这一转录因子却没有发生任何表达水平上的改变。 2.3T3一Ll脂肪前细胞在诱导后第二天应用PPARY拮抗体(AGXOIO4)，检测PPARY和C尼BPa蛋白表达水平，以及AdiPonectin蛋白水平的表达:发现PPA助和AdiPonectin的表达被完全阻断，而C尼BPa的表达被部分阻断。 3.c/EBPp的表达是脂肪前细胞向脂肪细胞转化的前提条件，但不足以产生PPARY受体，PPARY受体可以激活PPARY的活性，从而激活C尼BPa的活性。 4.外源性表达C尼BPp的SwisS细胞在开始诱导后的不同时间逐渐的降低C尼BPp的表达，发现随着C尼BPp表达的逐渐降低，PPA助和C尼BP。的表达也逐渐郑州大学2003年硕士毕业论文AGX0104抑制脂肪生成机理的研究降低。进一步说明是C/EBPp是影响PPA助和C尼BPa表达的关键因子，存在于PPA卿和C/EBPa传导通路的上游。 5.外源性的表达C尼BPp的SWISS细胞在脂肪分化的过程中，C/E BPp首先表达后，PPARY开始表达，说明PPARY的表达依赖于C尼BPp的表达，而C/EBPp的表达是PPARY的表达的先决条件。但是一旦PPA御开始表达后，C龙BPp的表达将不在重要，在开始诱导的第6天，C尼BPp开始降解。结论: 1.AGX0104可以阻断ppAR丫，Adiponeetin，perilipin，C/E Bpa的表达，进而阻断3T3一Ll脂肪前细胞向脂肪细胞的转化过程。 2.c/EBPp可以引起PPA卿的表达，但不足以引起C尼BPa的表达，需要PPARY受体的参与。 3.PPARY是引起C尼BPa表达的重要因素，没有PPARY的表达，就没有C尼BPa的表达。 4.C尼BPa的表达的产生有利于胰岛素敏感性的产生。任何可以影响C尼BP6，C尼BPa和PPARy表达的因素都可以作为调控肥胖以及胰岛素抵抗性的潜在因素。 5.AGX0104可阻断脂肪前细胞向脂肪细胞的转化过程，AGX0104有可能成为一个有效的防治肥胖和子宫内膜癌的有效手段。