利用转基因鼠模型验证猪的Myoz1/Myf6启动子上调肌肉组织中猪的PPAR-γ2/MyoD基因的表达

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转基因动物是将外源的目的基因导入宿主细胞中,使外源基因稳定的整合在宿主基因组中,并且可以随着转基因动物的传代稳定的将外源基因传给后代。通过转基因动物模型,研究外源基因在活体中的表达情况,进而获得人们理想的性状。本研究将猪肌肉特异性重组表达质粒pGL3-Myoz1-PPAR-γ2his-Basic和pSV40-Myf6-MyoDEGFP-N1线性化后利用显微注射技术获得PPAR-γ2和MyoD转基因鼠,从核酸水平、蛋白水平及活体水平等方面研究外源基因拷贝数、启动子组织特异性、目的性状表型等内容,以期为转基因猪提供有用的启动子。主要研究成果如下:  1、利用PCR技术成功鉴定出PPAR-γ2和MyoD转基因阳性鼠及外源基因的拷贝数,结果表明外源基因可以稳定地遗传给后代。采用实时荧光定量PCR、免疫组化和Western blot等技术证实猪肌肉组织特异性启动子Myoz1和Myf6可以上调PPAR-γ2(p<0.01)和MyoD(p>0.05)基因的表达,并且上调PPAR-γ2下游靶基因脂肪酸结合蛋白(fatty acid-binding protein4,FABP4)和脂蛋白脂肪酶(lipoprotein lipase,LPL)的表达(p<0.05);  2、采用冰冻切片和油红O染色,发现转基因鼠肌肉组织中脂滴含量明显多于野生型鼠;测定肌肉组织中甘油三酯含量,结果表明转基因鼠肌肉组织中甘油三酯含量显著高于野生型鼠(p<0.05);  3、采用实时荧光定量PCR检测MyoD转基因鼠心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、脂肪等不同组织中MyoD基因的表达情况,结果表明MyoD基因特异性地在肌肉组织中高表达;  4、采用肌肉组织横切切片和HE染色技术,利用IPP6.0软件分析发现转基因鼠肌纤维的直径和面积极显著性高于野生型鼠(p<0.01),而单位面积内肌纤维的数量则极显著低于野生型鼠(p<0.01)。  综上所述,猪的肌肉组织特异性启动子Myoz1和Myf6均可以在肌肉组织中上调外源目的基因的表达,最终影响肌内脂肪含量和肌纤维的生长,可以为制备转基因猪改善肌肉品质提供有效的启动子。
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