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猪圆环病毒（Porcine circovirus，PCV）属于圆环病毒科，是一种小的、无囊膜的单链负股环状DNA病毒。圆环病毒共有2个基因型，分别为无致病性的PCV1和有致病性的PCV2。PCV2病毒粒子侵入机体后可引起B淋巴细胞凋亡，导致机体免疫力下降，给世界养猪业带来了巨大的威胁。针对PCV2的鉴定和检测已有许多方法，如ELISA、IFA、PCR等，但是这些方法过程繁琐、耗时较长或者人为操作误差较大。而荧光定量PCR技术具有快速、灵敏、高特异性等特点，因此被越来越多的应用于各种病毒的检测。
本研究利用普通PCR技术扩增出PCV2的ORF2基因702bp片段，并克隆到pVAX1载体，以纯化的质粒作为PCR检测的标准模板，以10倍梯度稀释质粒为阳性标准品，摸索荧光定量PCR试验，并绘制标准曲线，以此建立一种荧光定量PCR特异性检测猪圆环病毒的方法。结果表明，该方法对PCV2有很好的特异性，其敏感性比常规PCR高100倍，批间与批内重复试验变异系数均小于2.5％。经临床应用表明荧光定量PCR方法的建立实现了对PCV2特异性的快速诊断和定量检测。
在利用猪肾脏细胞(PK-15)培养PCV2病毒中很容易污染无致病性的PCV1，给PCV2的纯化与培养带来困难。本研究还建立了一种多重荧光定量PCR检测技术以快速区分PCV1和PCV2。本研究设计了3条引物，其中D1是PCV1和PCV2共享引物。结果表明，PCV1和PCV2扩增产物的熔解温度(Tm)分别为84.5±0.20℃和86.6±0.03℃，可以根据熔解峰的不同来区分。反应的灵敏度分别可达到1×101拷贝/uL和1×102拷贝/uL，且与PRV、PRRSV和PPV无交叉反应。此方法为监控细胞毒的纯化培养提供了简便快捷的方法。
为了研究含CpG基序的核酸疫苗在小鼠体内的免疫作用，将40只6周龄Balb/c小鼠随机分为四组，其中:A组是PBS对照组，B组是pVAX1空载体组，C组是pVAX1-ORF2疫苗组，D组是18CpG-pVAX1-ORF2-疫苗组。各组均采用肌肉注射，每次200μL，疫苗有效成分含量100μg，2周后按相同途径和剂量进行第二次免疫，二免后4周用0.2mL的PCV2SD株细胞培养物(106.0TCID50/ml)接种小鼠，检测抗体变化情况并进行病理组织学观察。试验结果表明，注射疫苗后各组小鼠没有明显症状，攻毒后A、B组小鼠呈现微观剖检病变，疫苗组无病变。核酸疫苗pVAX1-ORF2和18CpG-pVAX1-ORF2均有一定的免疫刺激作用，但18CpG-pVAX1-ORF2组在免疫后抗体水平明显升高，而且二免后2周S/P值达到最高值0.4340，抗体水平下降缓慢，攻毒后抗体水平迅速升高，且作用持久。攻毒后荧光定量PCR结果显示小鼠脏器中出现病毒复制，但是疫苗组能够逐渐清除病毒。因此含有18个CpG的核酸疫苗在小鼠身上起到较好免疫保护作用。