【目的】利用毕赤酵母真核表达系统分泌表达重组蛋白SSB抗原,经过硫酸铵盐析、聚丙烯酰胺凝胶电泳后胶提取获得纯化重组SSB抗原;利用纯化SSB抗原建立检测抗-SSB抗体的斑点免疫金渗滤法。【方法】1. SSB基因重组毕赤酵母菌株SMD1168经过甲醇诱导,分泌表达重组蛋白SSB抗原于培养基上清中。2.利用硫酸铵沉淀和SDS-PAGE胶提取分离纯化毕赤酵母菌分泌表达的重组SSB抗原。3.制备胶体金,标记金黄色葡萄球菌蛋白A,将纯化重组SSB抗原固定在硝酸纤维素膜上,建立斑点免疫金渗滤法(dot immunogold filtration assay ,DIGFA)检测临床标本,结果与欧蒙医学实验诊断有限公司的斑点酶免疫法比较。【结果】1. SSB基因重组毕赤酵母菌分泌表达的重组SSB抗原在培养的第5天达到了相对高峰,背景蛋白相对最低。2.上清液中的重组SSB抗原,经过终浓度为50%(w/v)的硫酸铵沉淀,获得浓缩;浓缩蛋白液经过SDS-PAGE后,SSB抗原与杂蛋白分离;切出含SSB抗原的胶条通过电洗脱和透析,得到了具有抗原反应活性的纯化SSB抗原。3.利用重组SSB抗原建立斑点免疫金渗滤法,检测了100份临床标本,与欧蒙斑点酶免疫法相比较,两者之间符合率为92%。利用同批试剂进行每月一次为期3个月的重复检测实验,结果显示重组SSB抗原具有良好的稳定性。【结论】1.毕赤酵母真核表达系统分泌表达的重组SSB抗原含量高,背景杂蛋白少,组合使用硫酸铵沉淀、聚丙烯酰胺凝胶提取、电洗脱、透析等简单分离方法即可获得纯化重组SSB抗原。2.纯化重组SSB抗原纯度高,具有较好的抗原性。建立的斑点免疫金渗滤法,用于检测抗-SSB抗体显示出很好的特异性和敏感性。