整合素是脊椎动物细胞表面一类非常重要的细胞黏着分子，由α、β两个亚基构成。整合素通过与胞内骨架蛋白的相互作用介导细胞与胞外基质间的黏着。整合素不仅是细胞外基质与细胞内骨架之间的物理连接桥梁，同时是细胞信号转导中的重要组分。由整合素介导完成的一系列信号事件是细胞了解环境并作出反应的重要途径之一。Talin蛋白是重要的整合素激活因子，能够结合并激活整合素。同时作为连接细胞骨架与跨膜受体整合素的桥梁，在细胞粘附、迁移等过程中发挥着关键的调控作用。　　此研究是在实验室前期研究的基础上进行的延伸和拓展。实验室研究组在2012年解析了Talin-F2F3/R9复合物晶体结构。该结构显示，在自抑制状态下，Talin上的整合素结合位点F3与其尾部片段R9（1654-1822 a.a.）结合，此时整合素不能被活化。这一自抑制复合物结构为我们认识Talin的自抑制调控机制提供了新的视角，但是仍然无法揭示Talin自抑制状态下的全长结构。　　作为一个270 kD的蛋白，Talin除了F3和R9以外的部分在自身的活化过程中如何协同发挥作用，至今仍是未知的。此外，Talin蛋白可以通过C端最后一个α螺旋形成二聚体，而Talin蛋白到底是单体内自抑制还是二体内的两个分子互相抑制，目前不清楚。我们从体外重组表达和天然组织提取两个方面着手，以获得高质量的Talin蛋白样品。考虑到Talin蛋白整体难于结晶，我们尝试结合负染色技术和冷冻电镜三维重构的方法，获得Tlin蛋白处于自抑制状态下的整体结构。原核表达的Talin蛋白在负染电镜下观察蛋白状态不均一。我们通过结合生物交联剂和密度梯度离心的方法，蛋白状态的均一性得到了很大程度的提高，负染电镜图片质量较高，且图像衬度高，蛋白颗粒明显。但遗憾的是并未得到高质量的冷冻电镜图片。天然组织提取方面，我们采用硫酸铵沉淀法将大量粗制剂中的部分目的蛋白沉淀下来。再结合各种分离能力不同的阴离子交换柱、分子筛、疏水柱、阳离子交换柱，最终得到了较为纯净的Talin蛋白样品，负染电镜下能够看到蛋白颗粒。