论文部分内容阅读
目的：观察祛风湿中药对TGF-β1诱导的肾小球足细胞P-cadherin、 FSP-1、α-SMA基因和蛋白表达的影响,探讨祛风湿中药(中药复方及中药单体)对足细胞损伤的保护作用,为临床应用该类中药治疗肾性蛋白尿提供科学依据。方法：实验一：将足细胞传代培养于培养皿中,37℃分化培养,分为正常组、模型组、防己黄芪汤干预组、加减防己黄芪汤干预组。模型组及干预组分别用TGF-β1(终浓度5ng/ml)刺激,干预组在此基础上分别用含10%防己黄芪汤、加减防己黄芪汤大鼠含药血清进行干预。实验二：将足细胞传代培养于培养皿中,37℃分化培养,分为正常组、模型组、雷公藤甲素低浓度组、雷公藤甲素高浓度组。模型组及干预组分别用TGF-β1(终浓度5ng/ml)刺激,干预组在此基础上分别予5nM、10nM的雷公藤甲素进行干预。以上两个实验均采用MTT法检测培养细胞中的死亡率和通过JC-1检测细胞线粒体膜电位的转变用流式细胞术检测细胞早期凋亡率,采用逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)技术检测P-cadherin, FSP-1, α-SMA的基因表达及蛋白免疫印迹技术(western-blotting)检测P-cadherin, α-SMA蛋白表达。结果：实验一：MTT检测各组细胞存活率无显著差异；JC-1试剂检测模型组细胞线粒体膜电位低于正常组,防己黄芪汤组和加减防己黄芪汤组细胞线粒体膜电位水平较模型组升高,但各组间未显示出统计学差异。RT-PCR结果提示：模型组较正常组P-cadherin mRNA表达下调(P<0.05)；防己黄芪汤和加减防己黄芪汤含药血清干预组后P-cadherin mRNA表达明显上调(P<0.01),正常组与模型组间FSP-1mRNA和α-SMAmRNA各组间表达无显著性差异。实验二：与正常组比较,模型组P-cadherin基因和蛋白表达显著降低,10nM雷公藤甲素干预后P-cadherin蛋白水平较模型组显著增高(P<0.05),而5nM雷公藤甲素干预后该基因与蛋白表达均无显著性差异；模型组α-SMA蛋白水平较正常组明显增高,10nM雷公藤甲素干预后α-SMA蛋白表达显著降低(P<0.05)。5nM雷公藤干预后该基因与蛋白表达均无显著性差异。结论：防己黄芪汤和加减防己黄芪汤可抑制TGF-β1诱导的肾小球足细胞凋亡及维持其表型分子P-cadherin mRNA的表达；高浓度的雷公藤甲素能显著上调TGF-β1诱导的肾小球足细胞裂孔隔膜蛋白P-cadherin水平以及下调肌成纤维标志蛋白α-SMA的表达水平。提示祛风湿中药无论是复方(防己黄芪汤或加减防己黄芪汤)还是单体(雷公藤甲素)均具有足细胞损伤修复和保护作用。