前言在不孕夫妇中，男性因素导致的不孕约为25～40％。因此，精液质量越来越引起人们的重视。精液参数是反映精液质量的重要指标，而精子形态则是精液参数的一个重要组成部分。精子形态在评估精子受精能力及预测辅助生殖技术治疗结局方面，也发挥了很大作用。世界卫生组织(World Health Organization，WHO)规定，一份精液中形态异常精子比例＞70％，即为畸形精子症。精子形态越差，其自然妊娠的能力就越低。有些畸形精子症患者，往往需要采用辅助生殖技术来满足其生育要求。因此，我们不仅需要对精子形态做出准确的评估，还需要找到适合畸形精子症患者合适的精液处理方法及辅助生殖技术，以期改善其生育结局。目的寻找适合临床检验需要的简便快速准确的精子形态学染色方法，以利于对精子进行形态学评估；寻求适合畸形精子症患者精液的处理方法及辅助生殖技术，以提高此类患者的临床妊娠率。具体为：1．比较瑞氏-姬姆萨染色法(Wright-Giemsa stain)与WHO推荐的巴氏染色法(Papanicolaou stain)对精子形态染色评估的效果，希望找到可替代巴氏染色法的较为简单、有效的精子形态染色方法。2．比较临床上常用的两种精液处理方法Percoll梯度离心联合上游法及直接上游法对畸形精子症精液的处理效果，试图找到适合此类患者的精液处理方法。3．评估精子形态对不同辅助生殖技术的受精率、卵裂率和优质胚胎率的影响，以便找到适合畸形精子症患者的合适的辅助生殖技术。方法1．分别采用瑞氏-姬姆萨染色法和巴氏染色法对精液涂片进行染色，分析两种染色方法的结果。2．采用计算机辅助精子分析仪(computer assisted semen analysis，CASA)、精子形态染色、吖啶橙染色和流式细胞仪(flow cytometry，FCM)分别检测两种方法即Percoll梯度离心联合上游法和直接上游法处理前后常规精液参数、畸形精子比例及处理后精子核DNA成熟度、精子顶体完整性、线粒体膜电位和精子细胞内活性氧类物质(reactive oxygen species，ROS)含量的变化。3．比较分析精子形态对常规体外受精(in vitro fertilization，IVF)和卵胞浆内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection，ICSI)的受精率、卵裂率和优质胚胎率的影响。结果1．两种染色方法对精子形态的评估，结果无统计学差异(P＞0.05)；且对正常形态精子和异常形态精子的评估分别具有正相关性，相关系数依次为0.984，0.968(P＜0.01)。2．处理后，a级精子、a+b级精子比例比处理前有明显升高，精子畸形率降低，且percoll梯度离心联合上游法优于直接上游法，差异均有统计学意义(依次分别为：34.8±11.2％vs57.4±13.7％，61.4±12.8％；53.7±5.8％vs81.7±6.2％，85.7±5.7％；78.8±8.2％vs 70.2±12.0％，64.3±11.5％，P＜0.01)。优选精液中双链DNA精子的比例直接上游法高于percoll梯度离心联合上游法(72.0±20.3％vs 68.9±20.6％，P＜0.01)；而精子细胞内ROS含量则前者高于后者(146.7±65.2 vs 142.0±61.8，P＜0.05)。关于精子顶体完整性和线粒体膜电位，两种处理方法无显著差异(P＞0.05)。3．在IVF治疗组中，正常形态组的受精率高于畸形精子组的受精率(0.72±0.21vs 0.55±0.29)，且差异有统计学意义(P＜0.05)；正常形态组的卵裂率和优质胚胎率也高于畸形精子组，但差异无统计学意义(P＞0.05)。而在ICSI治疗组中，两种形态精子的受精率、卵裂率和优质胚胎率间的差异均无统计学意义(P＞0.05)。另外，在正常形态组中，两种助孕方法的受精率、卵裂率和优质胚胎率之间的差异，无统计学意义(P＞0.05)。在畸形精子组，ICSI组的受精率比IVF组的受精率高(0.72±0.20 vs 0.55±0.29)，差异有统计学意义(P＜0.05)；卵裂率和优质胚胎率，虽然ICSI组也高于IVF组，但两者间的差异无统计学意义(P＞0.05)。结论1．瑞氏-姬姆萨染色法对精子形态的评估效果与巴氏染色法比较无显著差异，且前者较简便、省时、快速、经济，因此可用瑞氏-姬姆萨染色法替代巴氏染色法来进行精子形态学的评估。2．Percoll梯度离心联合上游法及直接上游法均可有效改善精子功能，但对畸形精子症患者的精液，应根据临床采用的辅助生殖技术选择最适当的处理方法。3．对于正常形态的精液，应根据其具体的病因来选用合适的辅助生殖技术；而对于畸形精子症患者的精液，建议采用ICSI治疗，以提高其受精率，改善其生育结局。