重离子束与X射线辐照对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株CXCR4与RhoC表达的影响

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目的:1.探讨不同辐射方式对Tca8113细胞株细胞中CXCR4及RhoC mRNA的表达量的影响。2.探讨不同辐射方式对Tca8113细胞株细胞中CXCR4及RhoC的蛋白表达量的影响。3.以CXCR4与RhoC的基因与蛋白的表达量变化为指标,探讨重离子束与X射线对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株侵袭能力的影响,从而为临床采用重离子束作为舌癌放射治疗的新方法提供新的理论依据。方法:人舌鳞癌Tca8113细胞株由武汉大学口腔医学院惠赠,于中国科学院近代物理研究所冻存保藏。细胞经传代培养后,采用不同剂量的重离子束与X-ray对细胞进行辐射,辐射后分别提取不同组别的细胞的总RNA。采用荧光实时定量PCR法观察细胞中CXCR4与RhoC mRNA表达量的变化。同时提取细胞总蛋白,采用Western-blot方法对CXCR4与RhoC的蛋白表达量进行检测。X线照射系统采用美国Faxition43885D型X线仪,照射能量为50kVp,剂量率为0.5Gy/min。重离子束辐射于中国科学院兰州分院近代物理研究所HIRFL重离子终端进行,照射能量为250MeV;LET为75KeV,剂量率约为1Gy/min、空白对照组辐射剂量为0,X线组与重离子组则分别设1Gy,2Gy,4Gy的辐射剂量组别,并于各剂量组下依据RNA和蛋白的实验设计设4小时、8小时、12小时、24小时等时间点。结果:1.与空白对照组比较,在相同辐射剂量下,X线辐照组细胞中CXCR4的表达量在8h时较低,于12h达到高峰,该峰值在1Gy、4Gy组较为显著(p<0.05),在2Gy组则差异不明显(p>0.05);而重离子辐照组细胞中CXCR4的mRNA表达水平在辐照后12小时内均明显降低(p<0.05)。在相同时间点时,重离子组CXCR4的表达量与X线组比较则有显著降低(p<0.01)。2.不同辐射方式对RhoC的mRNA的相对表达量均有所抑制(p<0.05),且在1Gy、2Gy与4Gy不同辐射剂量下,其受到抑制的表达趋势基本一致。在X射线组,目的基因的表达随剂量上升,受到抑制的作用则减弱;而重离子组目的基因的表达则随剂量的上升,受到的抑制作用不变或增强。且重离子组细胞辐射后各个时间点的RhoC mRNA的表达较空白对照组的表达量均有显著下降(p<0.05)。3. Western blt实验结果显示:在辐射后第12小时,RhoC表达随剂量上升而有所上升,CXCR4的表达变化不大;在辐射后第24小时,RhoC的表达随剂量上升而下降,CXCR4也呈现出同样趋势但不明显。与real-time PCR结果基本吻合。结论:与常规X线相比,重离子束对体外培养的人舌鳞癌细胞中CXCR4的表达的抑制能力更强,而尽管RhoC的表达在X射线与重离子组都受到抑制,重离子束对RhoC的表达的抑制作用要优于X射线,提示重离子抑制舌鳞癌细胞侵袭的能力优于常规X射线。这可能为临床采用重离子束对舌癌进行放射治疗提供新思路。
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