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本研究以西伯利亚鲟为试验对象,对摄食调控因子CB1以及ghrelin的摄食调控作用和关系进行了初步探讨。首先,本研究通过分子克隆获得西伯利亚鲟CB1、ghrelin及其受体GHSR核苷酸序列;基于这些序列,通过实时荧光定量PCR方法,检测西伯利亚鲟这三个基因的m RNA在其22个组织中的表达模式以及对摄食的响应模式;最后,通过腹腔注射CB1拮抗剂以及侧脑室注射ghrelin及其受体拮抗剂,探究西伯利亚鲟CB1和ghrelin的摄食调控作用及两者之间的调控关系。1.西伯利亚鲟CB1、ghrelin及其受体GHSR的克隆、组织分布和摄食响应本研究通过分子克隆首次得到西伯利亚鲟CB1 c DNA全长1428bp,编码475个氨基酸;ghrelin c DNA全长345bp,编码114个氨基酸;GHSR c DNA部分序列,长500bp。在西伯利亚鲟22个组织器官中,CB1 m RNA除脾以外的组织器官中均有表达,其中端脑、间脑、中脑、小脑、延脑、性腺、鳔、眼和皮肤的表达量较高。ghrelin m RNA在所检测的22个组织中均有表达,其中食道、胃、鳔和眼表达较高。GHSR m RNA表达范围较小,仅涉及13个组织,其中端脑、间脑、中脑、小脑、延脑和皮肤表达量较高。摄食后1和3小时,仅端脑CB1 m RNA的表达量显著低于未投喂组（P<0.01）,而未投喂组中,端脑和间脑CB1 m RNA在投喂时间点前后均没有显著差异。禁食组端脑CB1 m RNA水平在前6天显著高于投喂组（P<0.01）。而禁食组内,端脑CB1m RNA水平逐步降低,最终在禁食10和15天显著低于对照组（P<0.01）。禁食组与对照组的间脑CB1 m RNA水平在禁食期间没有显著差异。摄食1小时和3小时后,西伯利亚鲟端脑、间脑和胃中ghrelin m RNA的表达量显著下降（P<0.05或P<0.01）,中脑ghrelin在摄食后与对照组没有显著差异;端脑和间脑GHSR m RNA极显著降低（P<0.01）,中脑中GHSR m RNA没有显著变化。这些结果暗示:CB1、ghrelin及其受体GHSR参与西伯利亚鲟增食欲过程。2.西伯利亚鲟CB1和ghrelin信号的增食欲作用腹腔注射5μg/g bw AM6545（CB1外周限制性拮抗剂）显著抑制了西伯利亚鲟1小时内的摄食量（P<0.01）,第1天腹腔注射5μg/g bw AM6545和0.5μg/g bw Rimonant（CB1中枢非限制性拮抗剂）后5小时内,累计摄食量显著降低,该作用持续至第5天（P<0.01）。腹腔注射5μg/g bw AM6545显著抑制了端脑和间脑ghrelin m RNA表达（P<0.05）,显著提高了端脑CART m RNA表达（P<0.01）;腹腔注射0.5μg/g bw Rimonabant显著抑制了端脑和间脑ghrelin m RNA表达（端脑P<0.01,间脑P<0.05）,同时显著抑制了间脑NPY m RNA表达（P<0.01）,显著提升了中脑CART m RNA表达（P<0.05）。侧脑室注射ghrelin极显著提高了西伯利亚鲟的摄食量（P<0.01）,而侧脑室注射ghrelin受体拮抗剂DLys极显著降低了西伯利亚鲟的摄食量（P<0.01）,同时DLys也能阻断ghrelin对摄食量的提高作用。进一步地,侧脑室注射ghrelin极显著降低了西伯利亚鲟端脑CART m RNA表达（P<0.01）,极显著提升了端脑和中脑NPY m RNA表达（P<0.01）。这些结果表明:西伯利亚鲟CB1和ghrelin信号具有促进摄食的作用。3.西伯利亚鲟ghrelin信号的增食欲作用依赖CB1信号腹腔注射AM6545+侧脑室注射ghrelin,显著升高西伯利亚鲟摄食量（P<0.01）,同时间脑和中脑NPY m RNA升高（P<0.05或P<0.01）,中脑ghrelin显著降低（P<0.01）;腹腔注射Rimonabant+侧脑室注射ghrelin,西伯利亚鲟摄食量无显著变化,端脑NPY和中脑ghrelin m RNA显著降低（P<0.01）,中脑NPY m RNA显著升高（P<0.01）。另一方面,侧脑室注射CB1激动剂ACEA显著提高西伯利亚鲟摄食量（P<0.01）,同时提高了中脑NPY m RNA（P<0.01）;而侧脑室注射ghrelin受体拮抗剂DLys未能阻断ACEA提高西伯利亚鲟摄食量（P<0.01）,但间脑ghrelin和NPY m RNA以及中脑CART和NPY m RNA均显著升高（P<0.01）。这些结果表明:西伯利亚鲟中枢神经系统中,ghrelin信号促进摄食的作用依赖于CB1信号,这可能与端脑奖赏激励的神经回路相关。综合上述结果,本研究得到如下结论:西伯利亚鲟CB1和ghrelin信号具有促进摄食的作用,同时ghrelin促进摄食的作用依赖于中枢而非外周CB1信号。