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急性胰腺炎(Acute pancreatitis,AP)是由多种病因引起的急性炎症反应,具有起病急骤,发展迅速,病情较重,并发症较多等特点。临床上大多数患着为轻度急性胰腺炎,病程呈自限性,预后较好,重度急性胰腺炎常伴有胰腺及周边组织坏死,临床病情凶险,病死率高。AP的发病机制复杂,近年来人们发现细胞凋亡在AP的发生发展过程中起重要作用,凋亡和坏死是AP时胰腺腺泡细胞死亡的两种主要形式,二者最大本质区别是凋亡细胞形成凋亡小体后很快被巨噬细胞所吞噬,不引起或很少引起炎症反应,AP的严重性与坏死程度呈正相关,而与凋亡程度呈负相关。早期诱导腺泡细胞凋亡是治疗AP的关键环节。含CUE结构域蛋白2(CUE domain containing 2,CUEDC2)是近年来新发现的一种蛋白。CUEDC2可以抑制核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路和Janus激酶/信号转导和转录活化因子(Janus kinase/signal transducer and activator of tran-scriptions,JAK/STAT)信号通路,还能够抑制巨噬细胞的激活及热休克蛋白70的伴侣活性,CUEDC2也参与了细胞周期调节。文献研究发现CUEDC2在不同肿瘤中的表达水平及作用不同。同时,CUEDC2也参与了调控炎症反应,如梗阻性肾病、结肠炎相关肿瘤等。此外,CUEDC2还参与了心肌缺血再灌注损伤、慢性髓细胞白血病等细胞凋亡的相关研究。但目前尚无CUEDC2在急性胰腺炎中作用研究的报道,因而本研究从细胞凋亡的角度分析CUEDC2对急性胰腺炎腺泡细胞的影响。目的:应用雨蛙素干预AR42J细胞建立AP离体细胞模型,采用质粒转染技术对AR42J细胞CUEDC2进行过表达,探究CUEDC2对AP胰腺腺泡细胞凋亡的影响。方法:1应用雨蛙素干预AR42J细胞建立AP模型。应用质粒转染技术,构建过表达CUEDC2的AR42J细胞模型。2实验分组:(1)阴性质粒对照组(Neg-CON):转染p EGFP-N1质粒,完全培养基培养;(2)CUEDC2质粒对照组(CUEDC2-CON):转染p EGFP-N1-CUEDC2质粒,给予完全培养基培养;(3)阴性质粒雨蛙素组(Neg-CAE):转染p EGFP-N1质粒,给予含10-7 mmol/L雨蛙素培养基培养;(4)CUEDC2质粒雨蛙素组(CUEDC2-CAE):转染p EGFP-N1-CUEDC2质粒,给予含10-7 mmol/L雨蛙素培养基培养;再将细胞分为4h、8h、24h三个亚组。3应用RT-PCR检测CUEDC2 m RNA表达水平。应用Western blot检测CUEDC2、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。Annexin V-PE/7-AAD双染联合流式细胞术检测造模后细胞早期凋亡率及晚期凋亡坏死率。结果:1 CUEDC2 m RNA表达:与对照组相比,雨蛙素组CUEDC2 m RNA表达量均降低,有统计学差异(P<0.05),并且随着时间的进展,雨蛙素干预的各组间表达水平无差异(P>0.05)。2建立过表达CUEDC2的AR42J细胞模型:比较各组CUEDC2蛋白表达水平,空白对照组和阴性质粒组之间无统计学差异(P>0.05);CUEDC2质粒组表达高于其余两组,与其余两组比较均有统计学差异(P<0.05)。可认为,成功建立了过表达CUEDC2的AR42J细胞模型。3 Bax的表达:与各自对照组相比,阴性质粒雨蛙素组和CUEDC2质粒雨蛙素组Bax表达水平均增高(P<0.05)。在两个对照组中,CUEDC2质粒对照组与阴性质粒对照组相比,Bax表达增高(P<0.05),并且随着时间延长无明显变化。在两个雨蛙素组中,CUEDC2质粒雨蛙素组与阴性质粒雨蛙素组相比,4h、8h时Bax表达增高(P<0.05),24h时无统计差异(P>0.05),并且随着时间延长,阴性质粒雨蛙素组Bax表达逐渐增高,至8h最高,24h与8h无统计差异,而CUEDC2质粒雨蛙素组Bax表达与时间进展无相关性。4 Bcl-2的表达:与各自对照组相比,阴性质粒雨蛙素组和CUEDC2质粒雨蛙素组Bcl-2表达水平均增高(P<0.05)。在两个对照组中,CUEDC2质粒对照组与阴性质粒对照组相比,Bcl-2表达降低(P<0.05),并且随着时间延长无明显变化。在两个雨蛙素组中,CUEDC2质粒雨蛙素组与阴性质粒雨蛙素组相比,4h、8h时Bcl-2表达降低(P<0.05),24h时无统计差异(P>0.05),并且随着时间延长,阴性质粒雨蛙素组Bcl-2表达逐渐降低,至8h最低,24h与8h无统计差异,而CUEDC2质粒雨蛙素组Bcl-2表达与时间进展无相关性。5 Bax/Bcl-2比值:与各自对照组相比,阴性质粒雨蛙素组和CUEDC2质粒雨蛙素组Bax/Bcl-2比值均增高(P<0.05)。在两个对照组中,CUEDC2质粒对照组与阴性质粒对照组相比,Bax/Bcl-2比值增高(P<0.05),随着时间延长无明显变化。在两个雨蛙素组中,CUEDC2质粒雨蛙素组与阴性质粒雨蛙素组相比,4h、8h时Bax/Bcl-2比值增高(P<0.05),24h时无统计差异(P>0.05),并且随着时间延长,阴性质粒雨蛙素组Bax/Bcl-2比值逐渐增高,至8h最高,24h与8h无统计差异,而CUEDC2质粒雨蛙素组Bax/Bcl-2比值与时间进展无相关性。并且,阴性质粒对照组Bax/Bcl-2比值小于1,即Bcl-2相对较高,而CUEDC2过表达后或者雨蛙素干预后Bax/Bcl-2比值大于1,即Bax相对较高。6细胞早期凋亡率和晚期凋亡坏死率:与各自对照组相比,阴性质粒雨蛙素组和CUEDC2质粒雨蛙素组早期凋亡率和晚期凋亡坏死率均增高(P<0.05)。在两个对照组中,CUEDC2质粒对照组与阴性质粒对照组相比,早期凋亡率增高,晚期凋亡坏死率降低(P<0.05)。在两个雨蛙素组中,CUEDC2质粒雨蛙素组与阴性质粒雨蛙素组相比,8h时早期凋亡率增高,晚期凋亡坏死率降低(P<0.05),而在24h时无统计差异(P>0.05)。结论:1我们应用雨蛙素成功建立了AP模型,并通过质粒转染成功建立了过表达CUEDC2的AR42J细胞模型。2在AP细胞模型,CUEDC2 m RNA的表达水平下调。3在AP细胞模型,细胞凋亡和坏死率均增高,过表达CUEDC2后可在AP早期一定时间内促进细胞凋亡,减少部分细胞坏死,从而减轻AP。研究表明,CUEDC2可以促进胰腺腺泡细胞凋亡,在AP中是一种保护性蛋白。