论文部分内容阅读
目的从青海牧区牧民家庭自制牦牛乳制品(酸奶、曲拉)中分离产EPS乳酸菌,构建青海地区乳酸菌种群系统发育树,鉴定高产EPS乳酸菌,并研究高产EPS乳酸菌的益生特性,为后期产EPS乳酸菌在乳品工业中的开发及利用提供理论基础。方法乳酸菌分离采用MRS平板法,结合形态、生化实验初筛,16s r DNA序列测定、NCBI数据库BLAST比对,Bio Edit软件Fast化序列,根据邻接法(Neighbor-Joining)建立进化树来确定乳酸菌种属;多糖产量定量分析采用苯酚–硫酸法;抑菌实验采用琼脂扩散法(Papamaloniet al.,2003)。模拟胃肠道存活实验采用酸碱度结合特定酶体外模拟实验完成;体内益生特性研究采用灌胃法造模、细胞因子测定采用ELISA法。结果从57份样品中分离到纯菌种86株,生化试验结合16s r DNA分析确定乳酸菌菌株52株,归属于5个菌属,分别是嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)33株、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)6株、侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)4株、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)5株、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilu)4株;发酵上清液EPS浓度为(16.09±5.39)mg/L,产量最高的是嗜热链球菌,来自果洛州;抑菌试验52株乳酸菌菌株对四种致病菌均有抑制作用,所有菌株抑制病原菌生长能力较弱;模拟胃肠道生存实验中,不同时间存活率存在差异,2χ=247.87,P<0.01,存活率中位数(四分位数间距,%)为:模拟胃液3 h为92.70(91.75,93.54),肠液3 h为88.54(87.99,89.18),肠液6 h中位数为84.36(83.21,86.28),肠液12 h中位数为76.02(74.42,77.21),肠液24 h中位数为65.43(64.32,66.94),存活率随时间的增长而降低。脏器指数:抗氧化特性研究中,心、肝、肾三个脏器指数无差异(P>0.05),脾脏指数存在差异(P<0.01),两两比较发现衰老组脾脏指数与其余各组存在差异,且高于其他各组,而除衰老组以外的其他四组脾脏指数无差异;免疫特性研究中,EPS处理组与正常组实验后体重存在差异(t=10.19,P<0.01),给予EPS灌胃处理组小鼠的体重大于自然生长的正常组,两组在脏器(心、肝、肾、脾、胸腺)指数上均无差异。MDA因子组间存在差异(F=50.97,P<0.01),两两比较发现正常组与各处理组均存在差异,衰老组跟其他各组存在差异,EPS低剂量组与其他各组均存在差异,EPS高剂量组与阳性对照组无差异。CAT因子各组存在差异(F=73.42,P<0.01),所有处理组与正常组比较均存在差异,EPS低剂量组与衰老组、EPS高剂量组与阳性对照组无差异,EPS低剂量组与EPS高剂量组、阳性对照组存在差异。SOD因子各分组间均存在差异。EPS处理组与正常组血清免疫因子(IL-10、1L-12、IFN-γ)均存在着差异,EPS灌胃处理组免疫因子表达量均高于正常组。结论青海57份传统牦牛发酵乳的优势乳酸菌是嗜热链球菌,次级优势菌是粪肠球菌;青海牧区传统牦牛发酵乳中乳酸菌产EPS产量相对较低;乳酸菌对四种肠道病原菌的抑制作用较弱,以对大肠杆菌抑制作用最强;抵抗胃酸生长能力较弱;模拟胃肠道生长不同环境存活率存在差异;不同菌株间存活率不完全相同;G10-3-3菌株所产EPS没有毒副作用;G10-3-3菌株所产EPS可以上调SOD、CAT产量,下调MDA产量,具有抗氧化特性;G10-3-3菌株所产EPS能使IL-10、IL-12、IFN-γ高表达,具有一定的免疫调节作用。