猪链球菌病是由链球菌属的细菌所引起的猪的传染病的总称。猪链球菌（SS）是世界范围内引致猪链球菌病最重要的病原。根据SS菌体荚膜抗原特性的不同,可分为35个血清型（1³4型和1/2型）,其中以2型（SS2）流行最广,对猪的致病性亦最强,给养猪业造成严重的经济损失,也给公共卫生带来威胁。疫苗免疫接种对预防和控制猪链球菌病虽效果显著,但免疫失败却常存在,确切原因复杂,其中不同地区的SS2具有不同的潜在致病力值得关注。本研究从43株SS2安徽地区临床分离株中,通过致病性、抗原性和稳定性试验,筛选SS2疫苗株;进一步通过培养基类别及营养成分、培养方式的比较,确定SS2疫苗株的最佳培养条件;旨为研制免疫保护性更佳的灭活疫苗及其多价、多联疫苗提供技术储备。根据毒力因子（CPS/EF/MRP/SLY）鉴定、溶血性测定及昆明鼠、斑马鱼致病性试验结果,初步筛选出6株SS2强毒株（编号分别为HF1、XC1、HF2、HF3、BZ1、BB1）为受试菌株。（1）通过平板计数法、改良寇氏法测定菌株生长曲线及半数致死量(LD₅₀)。（2）利用甲醛灭活全菌体,免疫兔及昆明鼠制备阳性血清,采用ELISA检测血清的抗体效价;灭活全菌体免疫昆明鼠及斑马鱼,进行攻毒保护试验,测定免疫保护率;采集昆明鼠脏器,制作病理组织切片。（3）受试菌株传代培养30代,取第10、20、30代菌株分别检测LD₅₀、血清抗体效价、免疫保护率,制作昆明鼠脏器病理组织切片。综合上述试验结果,筛选出SS2疫苗株。（4）测定筛选出的SS2疫苗株在三种培养基（TSB-YE、BHI、THB）中、不同葡萄糖含量（0.2%¹.2%）和血清含量（2%⁶%）的环境下、两种培养方式（振荡,静置）的生长曲线,确定最佳培养条件。结果显示:（1）HF3、BZ1、HF2、HF1、XC1、BB1对昆明鼠的LD₅₀分别为3.24×10⁸CFU/mL、3.31×10⁸CFU/mL、5.01×10⁸CFU/mL、1.00×10⁹CFU/mL、1.58×10⁹CFU/mL、3.72×10⁹ CFU/mL;对斑马鱼的LD₅₀分别为6.64×10⁵ CFU/mL、1.05×10⁵ CFU/mL、5.60×10⁵ CFU/mL、3.09×10⁶ CFU/mL、2.70×10⁶ CFU/mL、1.17×10⁶ CFU/mL。（2）灭活全菌体HF3、BZ1、HF2、HF1、XC1、BB1二次免疫家兔后的血清IgG抗体效价分别为1:102400、1:102400、1:204800、1:102400、1:51200、1:204800（以AH10-8株全菌体的超声裂解物为包被抗原）和1:6400、1:6400、1:1600、1:1600、1:800、1:3200（以重组SLY为包被抗原）;二次免疫昆明鼠后的血清IgG抗体效价分别为1:12800、1:25600、1:25600、1:3200、1:1600、1:6400（以AH10-8株全菌体的超声裂解物为包被抗原）和1:400、1:3200、1:400、1:400、1:100、1:800（以重组SLY为包被抗原）。灭活全菌体HF3、BZ1、HF2、HF1、XC1、BB1对昆明鼠和斑马鱼的免疫保护率分别为60%、100%、100%、60%、40%、60%和86.7%、66.7%、80%、40%、60%、60%;HF1、XC1、BB1免疫组的病理组织变化较HF2、HF3、BZ1免疫组更明显。（3）HF2、HF3在传代10代内对昆明鼠的LD₅₀分别上至1.07×10⁹ CFU/mL、2.19×10⁹CFU/mL,对斑马鱼的LD₅₀分别上至7.76×10⁶CFU/mL、9.97×10⁶CFU/mL,之后均趋向于稳定至30代,而BZ1传至10、20、30代均处于下降趋势。灭活全菌体HF2、HF3的血清抗体效价均由第10代1:51200下降至第30代的1:12800;灭活全菌体BZ1的血清抗体效价由第10代1:12800下降至第30代1:6400。第10³0代HF2、HF3、BZ1在对昆明鼠的免疫保护率分别为100%⁸0%、80%⁶0%、80%⁴0%,对斑马鱼的免疫保护率分别为66.7%⁶0%、80%⁶0%、60%⁵3.3%。第10³0代BZ1株病理组织变化较HF2、HF3更明显。（4）筛选出的SS2疫苗株HF2、HF3在BHI培养基中的活菌数最高,可达2.68×10⁹ CFU/mL、2.07×10⁹ CFU/mL;当葡萄糖含量达到0.4%时的HF2活菌数最大值为3.85×10⁹ CFU/mL,当血清含量达到4%时的HF2活菌数最大值为4.35×10⁹CFU/mL;振荡和静置培养时,HF2、HF3的活菌数最大值分别为4.35×10⁹ CFU/mL、2.70×10⁹ CFU/mL和3.90×10⁹ CFU/mL、2.94×10⁹ CFU/mL。结果表明:根据致病性、抗原性和稳定性试验结果,综合筛选出HF2和HF3作为SS2疫苗株。根据筛选出的SS2疫苗株培养条件的优化试验结果,确定BHI培养基（含有0.4%葡萄糖和4%血清）结合振荡培养方式,是培养HF2、HF3的最佳条件。