论文部分内容阅读
第一部分:PI3K/Akt通路在高糖毒性诱导的TC1-6细胞和胰岛α细胞胰岛素抵抗中发挥的作用目的:探讨慢性葡萄糖毒性对α细胞胰高糖素分泌的影响及α细胞胰岛素抵抗对其影响。方法:胰岛细胞和TC1-6细胞（α细胞株）分别培养于含低浓度（5.5mM）、中浓度（11.1mM）和高浓度（25mM）葡萄糖的培养基中1,3,5d,分别检测胰高糖素（Glc）分泌及其mRNA表达;加入不同浓度胰岛素6h后,观察对培养5d的原代胰岛和TC1-6细胞Glc分泌和基因表达的影响并用Western Blot方法检测高糖对α细胞Akt磷酸化的影响。结果:（1）培养1d时,低、中和高浓度葡萄糖培养的原代胰岛细胞和TC1-6细胞Glc分泌没有显著差别,培养3d时,高糖培养的胰岛细胞胰高糖素分泌明显增加42%[（2252.64±41.71）pg/mg protein vs（3205.97±45.53）pg/mg protein,P<0.05)],而TC1-6细胞胰高糖素的分泌无明显变化,试验第5d,中浓度和高糖培养的原代胰岛细胞胰高糖素均较低糖培养明显升高,分别增加52%[（2452.22±67.89）pg/mg proteinvs（3735.44±54.89）pg/mg protein,P<0.05)和117%[（2452.22±67.89）pg/mg protein vs（5320.20±398.51）pg/mg protein,P<0.05)],而TC1-6细胞仅在高糖培养5d时胰高糖素分泌较低糖培养明显增加,为74%(（78.62±4.72）ng/106 protein vs（136.8±10.94）ng/106 protein,P<0.05]。（2）与低糖培养1d相比,中、高浓度葡萄糖培养1d的原代胰岛细胞和TC1-6细胞Glc基因表达没有明显差别,但培养3d后,高糖培养的胰岛细胞胰高糖素基因表达较低糖培养升高125%（P<0.05）,而TC1-6细胞胰高糖素基因表达此时没有明显变化;当培养5d时,25mM糖浓度培养的原代胰岛和TC1-6细胞Glc基因表达明显升高,比低糖培养分别增高272%和78%;（3）10-7M胰岛素可以抑制低糖培养的原代胰岛和TC1-6细胞Glc的分泌,分别为60%[（2315.02±48.12）pg/mgprotein vs（915.99±32.54）pg/mg protein;P<0.05]和61%[（55.12±3.86）ng/106 proteinvs（21.59±1.30）ng/106 protein,P<0.05],但仅能轻微抑制高糖培养下原代胰岛和TC1-6细胞Glc的分泌;当胰岛素增至10-5M时,高糖培养下原代胰岛和TC1-6细胞的Glc的分泌也明显受到抑制,分别为66%[（3872.34±29.66）pg/mg protein vs（1307.65±23.34）pg/mg protein;P<0.05]和61%[（118.61±10.68）ng/106 protein vs（46.55±3.72）ng/106 protein;（4）加入10（?）胰岛素2h后,高糖和低糖培养下原代胰岛和TC1-6细胞P-Akt水平分别升高137%和70%以及200%和180%,但高糖组明显低于低糖组,给予PI3K抑制剂-wortmannin,低糖培养的原代胰岛和TC1-6细胞P-Akt水平抑制率明显高于高糖组。±结论:高糖可以引发原代胰岛和TC1-6细胞胰高糖素的分泌升高,其可能的机制与原代胰岛和TC1-6细胞胰岛素介导的PI3K/Akt信号通路受阻而产生的原代胰岛和TC1-6细胞胰岛素抵抗有关。第二部分:Syntaxin1A/SNAP-25蛋白在逆转α细胞高糖毒性中的作用目的:探讨逆转高糖毒性对α细胞胰高糖素分泌和合成的影响以及可能的机制。方法:TC1-6细胞（α细胞株）分别给予5.5mmol/L（低糖组）和25mmol/L（高糖组）葡萄糖的培养基培养10d,25mmol/L葡萄糖培养5d/5.5mmol/L葡萄糖培养5d（高糖.低糖组）以及5.5mmol/L葡萄糖培养5d/25mmol/L葡萄糖培养5d（低糖-高糖组）,检测各组细胞胰高糖素分泌及其mRNA的表达;Western印迹检测持续高糖以及由高糖降至低糖后TC1-6细胞Snare蛋白（syntaxin1A和SNAP-25）的表达水平;结果:（1）与高糖组TC1-6细胞相比,高糖-低糖组TC1-6细胞Glc分泌下降29%[（2.68±0.21）ng/mg protein vs（3.74±2.99）ng/mg protein,P<0.05];（2）与高糖组TC1-6细胞相比,高糖-低糖组TC1-6细胞Glc mRNA表达下降52.6%±2.8%（P<0.05）;（3）高糖组TC1-6细胞表达syntaxin1A和SNAP-25的水平较低糖组TC1-6细胞syntaxin1A和SNAP-25的表达分别升高36%和69%（P<0.05）,而高糖-低糖组syntaxin1A和SNAP-25蛋白表达与高糖组相比明显下调,分别下降49%和56%（P<0.05）。结论:解除高糖毒性α细胞胰高糖素分泌异常明显改善,促进胰高糖素分泌相关的syntaxin1A和SNAP-25蛋白表达相应降低。