同时检测谷物及中药材中伏马毒素B1和脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫层析方法的研究

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真菌毒素是一种真菌产生的有毒次生代谢产物,伏马毒素B1(FB1)和脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)是常见的真菌毒素中的两种水溶性毒素,目前主要受污染物是谷物和饲料等,对人体和动物都会造成不可逆伤害。近年来中药材受FB1和DON污染的情况也等受到广泛的关注和重视。本文建立了两种可同时检测谷物及中药材中FB1和DON的球型纳米金和花状纳米金免疫层析方法,用于定性检测谷物及中药材样品中FB1和DON的含量是否超过限量标准1 mg/kg。首先,本文采用柠檬酸三钠还原法制备的球型纳米金作为免疫标记物,研制可同时检测FB1和DON的免疫层析试纸条,并考察柠檬酸三钠添加量对球型纳米金粒径和试纸条灵敏度的影响规律:柠檬酸三钠添加量与球型纳米金粒径呈反比,且当纳米金粒径范围在20-30 nm之间时纳米金粒径的变化对试纸条的检测灵敏度并没有显著影响。通过实验条件优化最后采用了柠檬酸三钠添加量为1.4 mL制备的纳米金为最优球型纳米金,并研制出同时检测FB1和DON的免疫层析试纸条,该试纸条对于FB1和DON的灵敏度均可以达到20 ng/mL。其次,本文采用金种子介导生长法制备的花状纳米金作为免疫标记物,研制可同时检测FB1和DON的免疫层析试纸条,并考察氯金酸添加量、金种子液添加量以及对苯二酚添加量三个单因素对花状纳米金粒径和试纸条灵敏度的影响规律:氯金酸添加量及种子液添加量与纳米金粒径成反比,对苯二酚添加量与纳米金粒径成正比,且当花状纳米金表面分支比较明显时纳米金比表面积更大更有利于提高试纸条的检测灵敏度。通过实验条件优化最后采用了氯金酸添加量为0.25 mL、种子液添加量为300 mL以及对苯二酚添加量为0.5 mL制备的纳米金为最优花状纳米金,并研制出同时检测FB1和DON的免疫层析试纸条,该试纸条对于FB1和DON的灵敏度均可以达到5.0 ng/mL,这表明相对于使用球型纳米金作为免疫标记物制备的传统试纸条,灵敏度增加了四倍。最后,本文将研制的同时检测FB1和DON的球型免疫层析试纸条和花状免疫层析试纸条应用于谷物和中药材中真菌毒素的检测,在当地市场、网络销售以及其他地方采购总共116个样品(51个小麦样品,18个玉米样品以及47个中药材样品),试纸条与HPLC或ELISA的检测结果具有良好的一致性,因此本文研制的两种免疫层析试纸条适用于现场大批量样品中FB1和DON的筛查。
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