目的本实验通过应用不同方法对钛片进行表面处理,制备出具有不同形貌和成分的纯钛表面。通过体外实验来评价不同处理后的纯钛表面对骨髓间充质干细胞生物学行为的影响,探讨有利于纯钛表面矿化形成的表面处理方式。方法实验分组:分为未经处理过的光滑钛片组、酸蚀水热组以及酸蚀水热加等离子喷涂钽组(下文简称钽涂层组),每组9片。1 SD大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养及鉴定:使用组织块法培养原代骨髓组织细胞,对第3代大鼠BMSCs使用免疫荧光的方法检测细胞表面标志物;对第3代细胞进行成骨诱导和成脂诱导,经过茜素红染色和油红O染色后,倒置显微镜下观察。2细胞的形态和粘附:将第3代大鼠BMSCs接种到3组不同的钛片表面,培养24h后进行荧光染色,并在倒置荧光显微镜下观察各组细胞形态上的区别。将第3代大鼠BMSCs接种到3组不同的钛片表面,培养4、8、12小时后,对钛片上的细胞进行消化,并制成细胞悬液,用细胞计数板计数。3碱性磷酸酶的测定:将第3代大鼠BMSCs接种到3组不同的钛片表面,培养3/5/7天后,用ALP试剂盒测定三组试件上的细胞ALP水平。4矿化结节观察,钙离子浓度测定:培养11天后,用茜素红染液对三组试件上的BMSCs染色,体式显微镜下观察矿化结节染色,并用酶标仪检测钙盐沉积的水平。结果1 SD大鼠骨髓间充质干细胞鉴定:荧光显微镜下可见CD34-,CD44+,符合BMSCs表面标志物特征;倒置显微镜下可见,经过成骨诱导后可观察到矿化结节的形成,经过成脂诱导后可见到脂滴的形成,说明细胞具有成骨和成脂分化的能力。2细胞粘附形态和数量:光滑纯钛组表面细胞铺展不充分,细胞体积较小;酸蚀水热组表面细胞铺展较充分,可见伪足伸出;钽涂层组表面细胞铺展充分,细胞呈多角形,可见较多伪足。在细胞培养4、8、12h后,试件表面细胞粘附数量均为:钽涂层组>酸蚀水热组>光滑纯钛组,(P<0.05)。3试件表面细胞的ALP活性:细胞培养第3天时酸蚀水热组与钽涂层组高于光滑纯钛组(P<0.05);第5天与第7天时,酸蚀水热组与钽涂层组明显高于光滑纯钛组,钽涂层组高于酸蚀水热组(P<0.05)。4矿化结节观察及表面钙离子浓度检测:体式显微镜下观察到,钽涂层组和酸蚀水热组的染色较深且染色面积更大,光滑钛片组染色较为稀疏。钙离子定量结果中,钽涂层组>酸蚀水热组>光滑钛片组,(P<0.05)。结论1应用组织块法培养的大鼠骨髓干细胞符合间充质干细胞的特征。2酸蚀水热处理过的钛表面能促进骨髓干细胞的粘附、分化及矿化成骨。3在酸蚀水热处理过的纯钛表面等离子喷涂钽可以使其表面细胞的成骨能力更佳。图8幅;表5个;参95篇。