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前言MHC-Ⅰ链相关基因B(MICB)又称PerB11.2，属MHC-Ⅰ类区域非经典的HLA-Ⅰ类基因，具有编码、转录、表达蛋白的功能。MICB基因在HLA-B基因座着丝粒端约141.2kb，全长12.9 kb。它在肠上皮细胞的表面表达，不需β2微球蛋白的辅助，也不需结合抗原肽。作为NKG2D的配体，它与NKG2D／DAP10结合、传递细胞活化信号，为γδT细胞、CD8+细胞、NK细胞等发挥其免疫功能提供分子基础。MICB基因是在1994年首次被Bahram等人发现的。1997年Hitoshi Ando等人对MICB基因进行遗传变异研究，确定了MICB基因多态性的存在。2007年，NCBI报道在MICB基因中发现264个SNP位点。目前，国内外对于MICB基因SNP频率调查的报告较少。本研究应用PCR-RFLP技术，调查辽宁地区北方汉族人群MICB基因第3外显子437817SNP位点及启动子区445861／446216位点的分布状况，为法医学个人识别和亲权鉴定提供必要的基础数据。材料与方法1、228例静脉抗凝血取自辽宁地区汉族健康无血缘关系献血者。40例已知亲缘关系家系由法医血清学教研室提供。2、应用PCR-RFLP技术调查辽宁地区北方汉族人群MICB基因第3外显子437817位点及启动区445861／446216位点频率，并用于亲子鉴定案例。3、直接计数法计算437817、445861、446216位点SNP频率；进行Hardy-Weinberg平衡检验以及连锁不平衡分析；按Fisher法计算个人识别率(DP)，按Odelberg法计算非父排除率(EPP)，不同群体之间等位基因频率分布的差异用SPSS13.0统计软件进行卡方检验。实验结果1、437817位点在辽宁地区汉族人群中检测出两个等位基因C／G，等位基因C的频率为0.933，等位基因G的频率为0.067，两个等位基因可以构成三种基因型：C／C型、C／G型和G／G型。其中C／C型197例，C／G型31例，频率分别为86.4％、13.6％，未检测出G／G型。2、445861／446216位点构成四种等位基因组合型，在辽宁地区汉族人群中只检测出GC、GG、CC三种等位基因组合型，未检测出CG型。其中GC等位基因组合的频率为55.0％，GG为28.3％，CC为16.7％。在445861／446216位点10种理论组合基因型中检出6种，即GG／GC、GC／GC、CC／GC、CC／GG、GG／GG和CC／CC，频率分别为32.9％、28.9％、19.3％、8.8％、7.5％和2.6％。3、用MICB基因445861／446216位点等位基因组合型检测40例亲子鉴定案例，有36例双亲均可以提供给孩子相应的等位基因；4例被控父不能提供给孩子相应等位基因，提示可能排除。讨论MICB基因与MICA及HLA-Ⅰ类基因相似，具有较高的遗传多态性。随着研究深入发展，所发现MICB单核苷酸变异的数目越来越多。到目前为止，已经确定的SNP的数目可达264个。MICB基因作为功能性基因，其多态性与某些免疫性疾病有关。437817、445861／446216SNP位点的变异与某些免疫性疾病的相关性也有待进一步研究。为证实MICB445861／446216位点组合基因型酶切结果的可靠性，我们对PCR扩增产物进行测序分析，所得结果与目的序列一致。目前尚未见到有关MICB基因437817SNP位点频率的其他报道。445861／446216位点的研究报道只见于西班牙人群，应用SPSS13.0软件对辽宁汉族和西班牙人群进行比较分析，结果表明有显著性差异。445861／446216位点等位基因组合是具有较高鉴别能力的遗传标记系统，个人识别几率可达0.756，非父排除率为0.3437。在法医学个人识别和亲子鉴定中具有较高的应用价值。应用MICB基因445861／446216位点等位基因组合型对40例亲子鉴定进行检测，36例未排除生物学亲子关系，4例的被控父不能提供生物学父亲应该具有的组合型，提示排除父权。上述研究结果表明该系统可以应用于法医学亲子鉴定。结论1、MICB基因437817、445861、446216三个SNP位点在辽宁汉族群体中具有遗传多态性，且符合Hardy-Weinberg平衡。2、MICB基因445861／446216位点等位基因组合型分布在中国辽宁汉族和西班牙人群之间具有群体差异。3、MICB基因445861／446216位点等位基因组合具有较高的个人识别能力和非父排除率，是法医学个人识别和亲子鉴定的良好遗传标记，可用于法医学鉴定。