【摘 要】
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目的:1.1.建立从原始卵泡培育具有良好发育潜能的MⅡ卵的组织工程技术方案;2.2.从原始卵泡培育MⅡ卵制备胚胎干细胞;3.3.为人卵巢工程建立实验基础。方法:新生0.5d小鼠卵巢切片异
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目的:1.1.建立从原始卵泡培育具有良好发育潜能的MⅡ卵的组织工程技术方案;2.2.从原始卵泡培育MⅡ卵制备胚胎干细胞;3.3.为人卵巢工程建立实验基础。方法:新生0.5d小鼠卵巢切片异体移植到成年母鼠肾被膜下,21天后对宿主腹腔注射PMSG10IU/只,给药44h后用机械穿刺法收获卵巢移植物中的卵冠丘复合体,再通过体外成熟培养16h,得到的IVM-MⅡ卵进行体外受精,受精卵发育至囊胚时从内细胞团制备小鼠胚胎干细胞,并对建立的干细胞系进行鉴定。结果:1.从移植切片卵巢所获COCs在体外成熟后得到IVM-MⅡ卵,可受精并发育至囊胚分离出ICM,成功制备1批胚胎干细胞并传至P4代,并通过畸胎瘤、碱性磷酸酶染色、SSEA-1和嵌合体实验对建立的胚胎干细胞完成鉴定。结论:本实验报道证实了新生鼠卵巢(卵泡募集前卵巢)切片异体移植联合体外成熟培养获得的成熟卵(MⅡ卵)具有很好的发育潜能,可供制备胚胎干细胞。为人废弃卵巢培育MⅡ卵并制备胚胎干细胞建立了实验模型。
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