近年来,严重的暴发性养殖虾类疾病,使我国水产业蒙受了巨大损失。在认识到使用抗生素等药物的负面影响后,人们己把注意力转移到调动或激活虾类自身的免疫系统。对虾的免疫机能与对虾的健康密切相关。免疫增强剂能提高动物的免疫机能,促进动物的健康,增强动物的抗病力。本试验分3个内容进行,旨在研究WSSV卵黄抗体[Ig-Guard(shrimp)]作为一种免疫增强剂,对中国对虾、凡纳滨对虾的非特异性免疫及抗病毒能力的影响,及对克氏原螯虾LD50的影响。WSSV卵黄抗体提高中国对虾抗白斑综合征病毒感染力的研究:在基础饲料中分别添加3个水平(1%、0.5%、0.1%)的Ig-Guard(shrimp)制成3种试验饲料,同时以基础饲料为空白对照,以P280 Premix为阳性对照。采用连续投喂的方法,饲喂中国对虾(Penaeus chinensis) 21 d,分别测定了第7,14,21 d血淋巴的酚氧化酶(PO)、溶菌酶(UL)、酸性磷酸酶(ACP)、超氧化物歧化酶(SOD)活力,并对血蓝蛋白进行定量。结果显示这些免疫指标均能不同程度的被Ig-Guard (shrimp)促进。在免疫试验结束时,1% Ig-Guard (shrimp)组PO、UL、SOD活力与空白对照组均无显著差异(P>0.05),ACP活力与空白对照组有显著差异(P<0.05);PO、UL、SOD、ACP活力与阳性对照组均有显著(P<0.05)或极显著差异(P<0.01)。0.5% Ig-Guard (shrimp)、0.1% Ig-Guard (shrimp)组的PO、ACP、SOD与空白对照组均有极显著差异(P<0.01),0.5% Ig-Guard (shrimp)UL与空白对照组无显著差异(P>0.05),0.1% Ig-Guard (shrimp) UL与空白对照组有极显著差异(P<0.01);0.5% Ig-Guard (shrimp)组的UL、ACP、SOD活力与阳性对照组有极显著(P<0.01)或显著差异(P<0.05),PO活力与阳性对照组无显著差异(P>0.05),0.1% Ig-Guard (shrimp)组的四种免疫因子活力与阳性对照组均无显著差异(P>0.05)。在第21 d,用白斑综合征病毒(WSSV)投喂感染。虽然感染后的11 d内,免疫组对虾和对照组对虾均全部死亡,但是相对于对照组来说Ig-Guard(shrimp)对对虾的死亡具有一定的延迟作用,尤其是低剂量攻毒时的0.1%剂量组,效果尤为明显。但是在高剂量攻毒的情况下,Ig-Guard(shrimp)并没有显示出很好的保护效果。WSSV卵黄抗体对凡纳滨对虾免疫相关酶活力和抗病力影响的研究:在基础饲料中分别添加3个水平(1%、0.5%、0.1%)的Ig-Guard (shrimp)制成3种试验饲料,同时以基础饲料为空白对照。采用连续投喂的方法,饲喂凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei) 20 d,分别测定了第5,10,15,20 d血淋巴的酚氧化酶(PO)、溶菌酶(UL)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)及肌肉匀浆液的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)等非特异性免疫因子活性,并对血清及肌肉匀浆液中蛋白进行定量。结果表明,免疫组的PO、UL、ACP、AKP、SOD、CAT活力均显著高于对照组(P<0.05)。到免疫试验结束时,1% Ig-Guard (shrimp)、0.5% Ig-Guard (shrimp)两组的PO活力与对照组无显著差异(P>0.05),0.1% Ig-Guard (shrimp)组与对照组有显著差异(P<0.05);0.5% Ig-Guard (shrimp)组UL活力与对照组有显著差异(P<0.05),1% Ig-Guard (shrimp)、0.1% Ig-Guard (shrimp)两组与对照组均无显著差异(P>0.05);1% Ig-Guard (shrimp)组ACP活力与对照组无显著差异(P>0.05),0.5% Ig-Guard (shrimp)和0.1% Ig-Guard (shrimp)组分别与对照组有显著差异(P<0.05)和极显著差异(P<0.01);1% Ig-Guard (shrimp)、0.5% Ig-Guard (shrimp)、0.1% Ig-Guard (shrimp)三组的AKP活力与对照组均有极显著差异(P<0.01);1% Ig-Guard (shrimp)、0.5% Ig-Guard (shrimp)、0.1% Ig-Guard (shrimp)三组的SOD、CAT活力与对照组无显著差异(P>0.05)。免疫20 d后,用白斑综合征病毒(WSSV)投喂感染。攻毒后第7 d各免疫组的相对免疫保护率分别为17.95%、23.08%、35.90%。结果说明,Ig-Guard (shrimp)能有效提高对虾免疫因子的活性,对于提高抗WSSV感染能力也有一定作用。WSSV卵黄抗体保护克氏原螯虾防御白斑综合征病毒的研究:在基础饲料中分别添加3个水平(1%、0.5%、0.1%)的Ig-Guard (shrimp)制成3种试验饲料,同时以基础饲料为空白对照。以克氏原螯虾(Procambarus clarkii)为模式动物,采用连续投喂的方法,免疫21 d后,用白斑综合征病毒(WSSV)肌肉注射感染。注射相同稀释浓度的螯虾,其死亡率与添加Ig-Guard (shrimp)的剂量呈负相关,即添加Ig-Guard (shrimp)剂量越高,其死亡率越低;免疫组螯虾的半数致死剂量(LD50)高于对照组的半数致死剂量,而且其效果随着免疫剂量的增加而越来越明显。结果说明,Ig-Guard (shrimp)能延迟螯虾的死亡时间,在一定程度上对于提高抗WSSV感染能力有一定作用。对于特异性免疫系统尚不明确的对虾来说,信号识别蛋白在防御病原微生物过程中的作用尤为重要。到目前为止,已经成功地从对虾体内分离出β-1,3-葡聚糖结合蛋白(βGBP)、脂多糖结合蛋白(LBP),但是始终没有关于对虾肽聚糖识别蛋白(PGRP)的报道。我们之前的研究证实肽聚糖和Ig-Guard (shrimp)类似,也能够激活对虾体内酚氧化酶系统的活性及其它非特异性免疫因子活性,提高抗病力,这意味着PGRP有可能在对虾中存在。为了证明这一推测,我们分别用RT-PCR和PCR的方法,尝试克隆对虾PGRP基因,并对其进行初步的研究,但没有成功克隆出PGRP基因,本文也对此原因进行了初步的分析。