MicroRNAs是一种内源性的小非编码单链RNA。在人类基因组中,超过60%的基因会受到microRNAs的调控。研究表明microRNAs能够调控细胞的增殖、分化、凋亡以及胚胎的早期发育等过程。本课题以小鼠为实验动物模型,根据小鼠出生后不同日龄以及超数排卵激素(PMSG、hCG)处理后卵巢中mir-381的表达模式,通过real-time PCR进一步检测mir-381在不同发育阶段卵泡和卵泡颗粒细胞中的表达水平,从而揭示mir-381在卵泡发育中的表达规律并推测其可能发挥的作用。利用颗粒细胞体外培养模型和mir-381的模拟物和抑制物,进一步研究了mir-381对颗粒细胞的增殖、周期和凋亡的影响,并初步验证了mir-381在颗粒细胞中潜在的靶基因。实验结果如下：(1)mir-381在小鼠卵泡不同发育阶段的表达具有明显的差异性。Real-timePCR结果表明：与小腔前卵泡(90μm-130μm)相比,mir-381在较大的腔前卵泡(150μm-250μm)中的表达水平显著下调(P<0.05),而在较小的有腔卵泡(450μm-550μm)中的表达水平明显上调(P<0.05),之后在成熟卵泡(500μm-600μm)中表达水平显著下调(P<0.05)。(2)mir-381在小鼠不同发育阶段卵泡颗粒细胞中的表达具有明显的差异性。mir-381在小腔前卵泡(90μm-130μm)颗粒细胞中的表达水平较高,此后在大腔前卵泡(150μm-250μm)和较小的有腔卵泡(450μm-550μm)颗粒细胞中的表达水平显著下降(P<0.05),而在成熟卵泡(500μm-600μm)颗粒细胞中的表达水平又显著升高(P<0.05)。由此可见,mir-381在不同发育阶段卵泡颗粒细胞中的表达规律与其在不同发育阶段卵泡中的表达规律并不一致(有腔卵泡及其后),这些结果暗示mir-381在有腔卵泡形成后,由于卵泡腔的形成和卵丘细胞分化,mir-381在有腔卵泡的壁层颗粒细胞和卵丘细胞中的表达也可能存在一定的差异性。(3)mir-381抑制颗粒细胞的增殖。21日龄小鼠卵巢中获取腔前卵泡颗粒细胞,经过体外培养和传代后转染mir-381的模拟物或抑制物,利用酶标仪检测细胞增殖水平。结果发现：mir-381模拟物能够显著促进mir-381的表达水平,而抑制物则显著抑制其表达水平。此外,mir-381模拟物能够显著抑制颗粒细胞的增殖,而mir-381抑制物则显著促进颗粒细胞的增殖。这些结果表明mir-381可能在体内卵泡颗粒细胞增殖过程中具有抑制作用,这与其表达水平随着卵泡的增长而下降的结果是一致的。(4)mir-381影响颗粒细胞的周期。原代培养的颗粒细胞经过转染mir-381模拟物后检测细胞周期情况。结果发现：mir-381模拟物能够显著提高颗粒细胞G1期水平,同时使S期水平略有下降。这一结果暗示mir-381能够使颗粒细胞阻滞于G1期,而不进入S期(DNA合成期),从而使颗粒细胞的增殖过程受到抑制。(5) mir-381不影响颗粒细胞的凋亡。原代培养的颗粒细胞经过转染mir-381模拟物后检测细胞凋亡情况。结果发现mir-381模拟物对颗粒细胞的凋亡水平没有显著影响。这一结果表明mir-381可能不参与颗粒细胞的凋亡过程。(6) mir-381在颗粒细胞中靶基因的初步研究。为了深入揭示mir-381参与调控颗粒细胞增殖和周期的机制,我们首先利用microRNAs靶基因预测软件(TargetScan、DIANA-microT和PicTar),对mir-381的靶基因进行了预测。并初步筛选了与细胞增殖相关的靶基因acvr1、acvr2a以及与细胞周期相关的靶基因cdk2ap2、cdk-4、cdk-6。进一步通过转染模拟物或抑制物检测对这些靶基因表达水平的影响。结果发现：acvr1、acvr2a、cdk2ap2、cdk-4、cdk-6在颗粒细胞中的表达水平被mir-381模拟物显著下调,而被mir-381抑制物显著上调,这一结果初步暗示这些基因可能为mir-381在颗粒细胞中的靶基因。我们初步推测mir-381可能通过调控靶基因acvrl和acvr2a的表达水平抑制颗粒细胞的增殖,通过cdk2ap2、cdk-4、 cdk-6而调控颗粒细胞的细胞周期。总之,本论文揭示了mir-381在小鼠不同发育阶段卵泡及对应颗粒细胞中的表达规律,研究了其在颗粒细胞的细胞增殖和细胞周期调控中的重要作用,并初步揭示了mir-381在颗粒细胞中的靶基因。该研究结果为进一步深入理解卵泡发育和颗粒细胞增殖的调控机制提供了理论参考。