论文部分内容阅读
本文利用已经得到的阳性杂交瘤细胞AHB2、AHB4、AHB6，在小鼠体内诱生腹水，测定抗体亚型、蛋白含量、蛋白分子量、效价及特异性，并进行AHB2和AHB6的亲和常数和抗原位点分析，利用Protein-A亲和纯化AHB6，并将其初步应用于BSP免疫组化的检测研究。
主要研究结果如下：
1.三株阳性杂交瘤细胞AHB2、AHB4、AHB6经过2～4次亚克隆后，采用小鼠腹腔接种法得到腹水，测得抗体亚型分别为IgM、IgM、IgGl，轻链均为K链。
2.AHB2的重链约为70kDa，轻链约为23kDa；AHB6的重链约为50kDa，轻链约为23KDa；AHB2、AHB4、AHB6细胞株腹水mAb的效价分别为1×10<-4>(初始浓度为9.2mg/ml)、1×10<-3>(初始浓度为2.72mg/ml)和1×10<-6>(初始浓度为8.5mg/ml)，纯化后的AHB6抗体的效价为1×10<-5>(初始浓度为0.574mg/ml)；免疫印迹结果表明，AHB2和AHB6均与BSP有特异性的结合。ELlSA检测表明AHB2、AHB4和AHB6均与rhBSP呈强阳性反应；AHB2 mAb的亲和常数约为(3.01±0.30)×10<8>M<-1>，AHB6 mAb的亲和常数约为(2.94±0.18)×10<10>M<-1>，纯化后的AHB6mAb的亲和常数约为(2.14±0.12)×10<10>M<-1>；AHB2和AHB6针对rhBSP的相同抗原表位。
3.在小肠、大肠、食道、胃、胰腺、肾上腺、肝脏、脾脏、心脏、膀胱、甲状腺、肌肉、肺、肾脏等人正常组织中BSP的表达为阴性；而在甲状腺癌、乳腺癌、胃癌、肠癌和非小细胞肺癌的细胞浆中均有BSP的表达，在乳腺癌和胃癌中还可见细胞核染色，并且在甲状腺癌、乳腺癌和胃癌中BSP的表达呈强阳性。BSP免疫组化结果初步提示本研究制备的BSP mAb(AHB6)可以替代Chemicon公司的同类抗体。