背景与目的 近年来高尿酸血症（hyperuricemia，HU）和痛风（gout）的发病率日益增高，已成为一种常见病。为了避免关节炎反复发作和肾脏病变形成，痛风患者需要长期服用有降低血尿酸（uric acid，UA）作用的药物。但目前安全、有效、经济的降UA药物较少。我国用中草药治疗痛风病虽有悠久的历史，但迄今尚无能够有效降低血UA的中药制剂用于临床。因此，研制新型降UA药物，特别是借鉴中医经验开发有降UA作用的中草药具有重要的意义。 本研究的目的是建立一套适用于筛选降UA药物筛选的系统方法，主要包括适用的HU模型建立方法及相关的RP—HPLC检测方法。在此基础上，参考中医治疗痛风的丰富经验，初步筛选出有降尿酸作用的中草药。全部研究分为四个部分进行： 第一部分：建立用RP—HPLC技术同时检测血、尿嘌呤代谢产物和肌酐的方法。建立HU模型时所使用的药物会严重影响现有的UA检测方法，因此需要首先建立不受建模药物干扰的检测方法。HPLC是新型的检测技术，具有准确、灵敏、可同时检测多种成分的优点。本部分研究选用国产C₁₈色谱柱，探索同时检测次黄嘌呤、黄嘌呤、尿酸、尿囊素和肌酐的方法。 第二部分：建立大鼠高尿酸血症模型。目前尚无统一的高尿酸血症动物模型建立方法。人类高尿酸血症多为肾脏排泄尿酸减少的类型，而现有的建模方法在升高血尿酸的同时，也使尿尿酸含量显著增高。动物模型与人类疾病之间的差别较大，不利于降尿酸药物的筛选。本部分研究利用尿酸酶抑制剂氧嗪酸和抑制肾脏排泄尿酸的药物吡嗪酰胺，建立一种与人类高尿酸血症 天津医科大学博士研究生学位论文更为接近的高尿酸血症动物模型。 第三部分:痛风中药治疗方剂的统计分析。我国中草药资源丰富，研究者需要建立科学的方法以便从数以万计的中药资源中快速确定研究的重点。传统中医的经验值得借鉴，但由于对痛风的认识与现代医学有不同之处，因此借鉴中医经验应当有所选择。本部分研究依据明确的标准，选出疗效明确的部分痛风中药治疗方剂，利用统计分析的方法，初步筛选出需要重点研究的中草药。 第四部分:部分中药对高尿酸血症动物模型尿酸代谢的影响。在前三部分研究的基础上，利用新型的高尿酸血症动物模型和检测方法，观察部分重点中草药对UA代谢的影响。 方法 第一部分:用国产CI。反相色谱柱为固定相，以磷酸盐缓冲液（0.OSM，pH=6）为流动相，流速lml/分钟，进样量20林1，柱温保持室温，检测波长210.Inm一400nm。每份标本检测时间为30分钟。血清标本在检测前需去蛋白，尿液标本需稀释和过滤。 第二部分:（l）将24只大鼠随机分为4组，分别用尿酸、氧嚓酸、氧嚓酸+尿酸以及氧嗦酸+毗嗦酞胺4组药物制备模型。每日腹腔注射2次，连续7天。比较建模前后的尿酸代谢的变化。（2）将18只大鼠随机分为3组，均腹腔注射氧嗦酸+毗嗦酞胺，每日分别用苯浪马隆、别喋吟醇以及生理盐水灌胃1次，连续7天。比较三组大鼠建模前后的尿酸代谢变化。 第三部分:（l）按照诊断明确、方法科学、疗效可靠、没有干扰因素的标准，检索公开发表的中医治疗痛风方剂45个，统计各种中药的使用次数，选择出使用次数较高的药物。（2）将45个方剂按照疗程和血UA恢复正常的比例分为A组（疗程短于30天，血UA恢复正常者超过50%的病例数）和B组（疗程超过30天，血UA恢复正常者少于50%的病例数）。A组方剂26个，B组方剂19个。统计A组使用次数较多的药物，比较常用药物在两组使用次数的差别。 天津医科大学博士研究生学位论文 第四部分:将30只大鼠随机分为五组，在腹腔注射氧嚓酸+毗嚓酞胺建立HU模型的基础上，分别用中汇痛风定、中药l、中药2和中药3每日灌胃1次。7天后比较尿酸代谢的变化。 结果 第一部分:用R P.H卫LC技术可理想地分离次黄嘿吟、黄嗓吟、尿酸、尿囊素和肌配，准确性与重复性好。 第二部分:用腹腔注射OA+PZA的方法可以成功建立大鼠高尿酸血症模型。此方法在显著升高血UA的同时，可使模型尿UA含量显著减少，与人类高尿酸血症的主要类型更为近似。腹腔注射这种给药方式克服了以往给药方法剂量不准确和药物浪费的缺点。用此方法建立的高尿酸血症模型不仅能够筛选降尿酸药物，而且可以初步确定药物的作用机理。 第三部分:从45个痛风中药方剂中初步筛选出16种使用次数显著高于其他药物的中草药，即苍术、牛膝、慧该仁、黄柏、车前子、土获等、甘草、草解、防己、赤芍、大黄、泽泻、秦芜、木瓜、忍冬藤、威灵仙。这些药物可能对UA代谢有影响。16味常用药物中有9味属于清热祛湿药，且多具有治疗风湿痹痛的作用，提示清热祛湿中药可能具有降尿酸作用。黄柏、草解、土获荃在疗效显著方剂组的使用次数显著高于疗效较弱方剂组，提示这3味药物对方剂的疗效有重要影响，可能有降尿酸作用。 第四部分:中药l、中药2有降低血尿酸的作用，其中中药1可减少尿?