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核桃仁多酚(核桃多酚),作为一种重要的天然活性物质,具有抗氧化、抗肿瘤和抗炎等特性,但对缓解免疫毒性的影响尚不清楚。汽油机尾气颗粒物(Gasoline Exhaust Particles, GEP)和柴油机尾气颗粒物(Diesel Exhaust Particles, DEP)是重要的大气污染物,4-戊基苯酚(PP)和3-甲基-4-硝基苯酚(PNMC)分别是GEP和DEP中有效活性成分。本论文在确定PP和PNMC对小鼠脾淋巴细胞的免疫毒性基础上,再研究核桃多酚提取物(Walnut Polyphenol Extract, WPE)对PP和PNMC引起的免疫毒性的影响,并初步探讨其作用机制。主要研究结果如下：(1)首先建立PP和PNMC诱导小鼠脾淋巴细胞免疫损伤的模型,分别将PP或PNMC (10-6M、10-5M、10-4M)与脾淋巴细胞共培养48h后,通过MTT法测定细胞活力。结果显示PP和PNMC均以浓度相关的方式抑制细胞生长,且均在10-4M浓度时产生显著的抑制作用,因此这一剂量被用于后续的所有实验中。此外,PP的抑制作用强于PNMC。这些结果表明PP和PNMC引起了脾淋巴细胞的细胞毒性。(2)为研究WPE对PP和PNMC诱导脾淋巴细胞毒性的影响,将不同浓度的WPE联合PP或PNMC与脾淋巴细胞进行共培养48h,通过MTT法检测细胞活力。结果显示WPE显著地提高了暴露于PP和PNMC的脾淋巴细胞活力,并且在浓度为0.01～1.0μg/mL时,以浓度依赖的方式恢复细胞活力。当WPE浓度为1.0μg/mL时,细胞活力恢复至与没有受到PP和PNMC毒性作用的对照一样的水平,因此选择1.0μg/mL浓度用于后续的所有实验中。1.0μg/mL WPE对脾淋巴细胞没有毒害作用。这些作用表明WPE对PP和PNMC诱导的脾淋巴细胞毒性具有缓解作用。(3)为进一步探讨WPE对PP和PNMC诱导脾淋巴细胞损伤的缓解作用,将WPE联合PP或PNMC与脾淋巴细胞进行共培养48h后,利用流式细胞技术,对脾淋巴细胞的各亚群百分比进行测定,包括B细胞(CD19)、T细胞(CD3)、CD4 T细胞亚群和CD8 T细胞亚群,运用ELISA实验,检测淋巴细胞分泌的细胞因子,即白细胞介素-2、白细胞介素-4和颗粒酶B分泌量。该研究结果显示,PP和PNMC可选择性损伤脾脏T细胞并抑制其分泌细胞因子和颗粒酶,然而两个染毒剂不影响B细胞。当WPE联合处理后提高了脾脏CD3+、CD4+和CD8+T细胞百分数,同时也上调脾脏T淋巴细胞分泌细胞因子和颗粒酶(白细胞介素-2、白细胞介素-4和颗粒酶B)的水平。这些结果表明WPE可以保护脾脏T细胞及其功能,缓解PP和PNMC的毒性作用。(4)初步研究WPE缓解PP和PNMC诱导脾淋巴细胞免疫毒性的机制,测定细胞内羟自由基(OH·)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的水平。结果显示PP和PNMC使脾淋巴细胞内OH·和MDA的水平升高了,SOD和GSH-Px的活性降低了。WPE联合处理后减少了脾淋巴细胞内活性氧的生成,抑制脂质过氧化,并恢复抗氧化酶的活性,表明WPE通过减弱氧化应激的方式缓解PP和PNMC诱导的脾淋巴细胞免疫毒性。(5)通过福林酚法测定WPE的总酚含量,结果为34800±200mg GAE/100g。利用LC-MS技术分析WPE中所含酚类组成,结果发现其中含有16种多酚化合物,包括鞣花单宁、槲皮素、槲斗酸双内酯和没食子酸。以上结果表明,核桃多酚通过恢复脾淋巴细胞活力、T细胞亚群数和T细胞分泌细胞因子和颗粒酶的功能,可以显著地缓解PP和PNMC诱导的脾淋巴细胞免疫毒性。核桃多酚的这一缓解作用可能与减弱PP和PNMC诱导的脾淋巴细胞氧化损伤有关。