【摘 要】
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目的:观察人羊膜间充质干细胞（human amniotic mesenchymal stromal cells,h AMSCs）移植后对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的急性肺损伤（acute lung injury,ALI）大鼠肺上皮钠离子通道（epithelial Na+channel,ENaC）表达的影响,进一步探讨h AMSCs干预ALI可能的作用机制,从而为AL
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目的:观察人羊膜间充质干细胞（human amniotic mesenchymal stromal cells,h AMSCs）移植后对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的急性肺损伤（acute lung injury,ALI）大鼠肺上皮钠离子通道（epithelial Na+channel,ENaC）表达的影响,进一步探讨h AMSCs干预ALI可能的作用机制,从而为ALI的治疗提供新的策略。方法:将84只SD雄性大鼠随机分为4组,每组21只。生理盐水对照组（N组）:舌下静脉注射0.25ml生理盐水,2小时后经尾静脉注射0.25ml生理盐水;h AMSCs对照组（NH组）:舌下静脉注射0.25ml生理盐水,2小时后经尾静脉注射使用4,6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐（4,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI）标记的h AMSCs 250μl（1×104/μl）;急性肺损伤组（ALI组）:舌下静脉注射LPS（4mg/kg）造模,2小时后经尾静脉注射0.25ml生理盐水;h AMSCs干预组（LH组）:舌下静脉注射LPS（4mg/kg）造模,2小时后经尾静脉注射使用DAPI标记的h AMSCs 250μl（1×104/μl）。每组分为6小时、12小时、72小时3个亚组并每个亚组随机处死7只大鼠。在荧光显微镜下观察NH组及LH组h AMSCs在肺组织中的定植情况;应用酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测方法对测84只大鼠支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）中白细胞介素1（Interleukin 1,IL-1）、IL-10、肿瘤坏死子α（tumor necrosis factorα,TNF-α）的含量变化;采用热干燥法测肺组织湿干重比值（W/D）,HE染色镜下观察各组大鼠肺组织病理形态,使用免疫组织化学法（Immunohistochemistry,IHC）测定ENaC各亚基（ENaCα、ENaCβ、ENaCγ）的表达;免疫印迹试验（Western blot）检测每组大鼠肺组织ENaC各亚基（ENaCα、ENaCβ、ENaCγ）的表达量。结果:NH及LH组,在荧光显微镜下可观察到在肺泡周围有蓝色荧光标记的hAMSCs,其中以LH组定植较多,NH组定植较少,说明h AMSCs能定向“归巢”至受损肺组织。N组与NH组相比较,各组6、12、72小时肺组织病理评分、W/D、BALF细胞因子IL-1、IL-10、TNF-α含量变化、ENaCα、ENaCβ、ENaCγ蛋白表达无明显差异（P>0.05）;ALI组、LH组各时点大鼠肺组织病理评分、W/D、BALF细胞因子IL-1、IL-10、TNF-α含量均增高,ENaCα、ENaCβ、ENaCγ蛋白表达下调,两两之间相比较其差异均有统计学意义（P<0.05）;ALI组与LH组同一时间点相比较,LH组大鼠肺组织炎症浸润病理评分、W/D、BALF细胞因子IL-1、IL-10、TNF-α含量均下降,ENaCα、ENaCβ、ENaCγ蛋白表达均上调（P<0.05）。在ALI组中,与6小时组相比较,12小时组大鼠肺组织炎症浸润病理评分、W/D、BALF细胞因子IL-1、IL-10、TNF-α含量、ENaCα、ENaCβ、ENaCγ蛋白表达均无明显差异（P>0.05）;72小时组大鼠肺组织炎症浸润病理评分下降、W/D下降、BALF细胞因子IL-1、IL-10、TNF-α含量降低,ENaCα、ENaCβ、ENaCγ蛋白表达上调（P<0.05）。在LH组中,与6小时组相比较,12小时组大鼠肺组织炎症浸润病理评分、W/D、BALF细胞因子IL-1、IL-10、TNF-α含量、ENaCα、ENaCβ、ENaCγ蛋白表达均无明显差异（P>0.05）;72小时组大鼠肺组织炎症浸润病理评分下降、W/D下降、BALF细胞因子IL-1、IL-10、TNF-α含量降低,ENaCα、ENaCβ、ENaCγ蛋白表达上调（P<0.05）。结论:外源性hAMSCs静脉移植可以定向“归巢”至大鼠肺组织内,且以ALI大鼠明显。h AMSCs干预可以抑制IL-1、TNF-α、IL-10的释放;并且h AMSCs干预可以上调ENaCα、ENaCβ、ENaCγ的表达,加强肺泡液体的清除,降低肺组织的损伤。
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