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目的:检测苗药 HL-1112对幽门螺杆菌的体外抗菌活性,观察苗药HL-1112作用幽门螺杆菌前后的蛋白质及基因表达水平的变化,初步探讨苗药HL--1112对幽门螺杆菌的抑菌机制,为深入研究苗药 HL-1112的作用机制和开发利用苗药 HL-1112提供科学依据。 方法:采用琼脂稀释法检测苗药HL-1112对幽门螺杆菌国际标准测序株ATCC700392的最低抑菌浓度(Minimal inhibitory concentration,MIC);选用三氯醋酸/丙酮沉淀法收集药物作用前后的幽门螺杆菌全菌蛋白,应用双向凝胶电泳技术(2-DE)对其进行分离,PDquest软件寻找药物作用前后表达差异明显的蛋白质点,ABI-4800质谱仪对差异蛋白点进行质谱鉴定,生物信息学分析差异蛋白的性质与功能;采用 Real-time PCR技术检测2-DE中的差异蛋白-过氧化氢酶在药物作用前后的基因表达水平。 结果:苗药 HL-1112对幽门螺杆菌国际标准测序株 ATCC700392的MIC为4mg/mL,且其对细菌的抑制作用与药物浓度成正比;通过质谱技术鉴定出14个差异蛋白点,其中延胡索酸还原酶黄素蛋白亚基、烷基过氧化氢还原酶、假想蛋白0130、粘附-巯基还原酶、非血红素铁蛋白仅在药物作用前的全菌蛋白中表达,乙酰脲利用蛋白A、亮氨酰胺肽酶、过氧化氢酶、cag致病岛、延胡索酸还原酶铁硫亚基和假想蛋白0721在苗药 HL-1112作用后明显下调,而丙酰胺左旋门冬氨酸酶、延长因子 P和NADPH黄素还原酶的蛋白表达则在药物作用后上调;Real-time PCR结果显示幽门螺杆菌过氧化氢酶在药物作用后的基因表达水平高于药物作用前的表达水平。 结论: 1.苗药 HL-1112对幽门螺杆菌具有良好的抑菌效果,其MIC为4mg/mL,且抗菌活性与药物浓度成正比; 2.苗药 HL-1112通过干扰Hp的抗氧化系统,抑制Hp的毒力因素及影响Hp的能量代谢与生物合成等发挥其抑菌机制; 3.苗药 HL-1112影响 Hp过氧化氢酶的蛋白表达水平,推测其可能是抑杀幽门螺杆菌的机制之一。