论文部分内容阅读
目的：通过测定哮喘小鼠CD4+CD25+调节性T细胞／CD4+T细胞百分率及CD4+CD25+调节性T细胞上的TLR4表达的变化；观察糖皮质激素对哮喘小鼠CD4+CD25+调节性T细胞及TLR4的影响；评估早期应用草分枝杆菌干预对哮喘小鼠CD4+CD25+调节性T细胞及TLR4的表达的影响,探讨草分枝杆菌的免疫调节作用,为寻找新的途径更好地预防和治疗哮喘提供实验依据。方法：将雌性BALB/c小鼠40只,采用随机数字表法分为四组：正常对照组(NS)、哮喘组(OVA)、哮喘地塞米松治疗组(OVA/GC)和哮喘草分枝杆菌治疗组(OVA/Utilin),于实验第0d和第14d OVA组、OVA/GC组和OVA/Utilin组小鼠采用腹腔注射卵白蛋白(OVA)和氢氧化铝(Al(OH)3)混合液致敏；从实验第21d起开始,以2%OVA每天雾化30min,连续雾化5d激发制备哮喘模型,OVA/GC组于每次激发前30min腹腔注射地塞米松(1mg/Kg), OVA/Utilin组于第一次致敏前2周腹腔注射草分枝杆菌F.U.36注射液(乌体林斯)0.57ug隔天一次共三次,NS组则给予生理盐水腹腔注射和雾化做对照。所有小鼠于末次激发后24 h引颈处死。取小鼠左肺组织作病理切片,苏木素—伊红(HE)观察炎症改变；取小鼠脾脏于不锈钢细胞筛上研磨、淋巴细胞分离液分离制备脾组织单个核细胞悬液,利用流式细胞检测技术检测各组CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的百分率及CD4+CD25+调节性T细胞上的TLR4平均荧光强度。结果：1)小鼠哮喘模型建立成功模型组小鼠在雾化过程中出现了明显的类似人类哮喘急性发作症状：呼吸加快加深、前肢缩抬、二便失禁等表现。病理表现为：NS组气道上皮无增厚,气道及血管周围未见炎症表现；OVA组气道及血管周围均可见明显以嗜酸性粒细胞增多为主的炎性细胞浸润,部分细支气管上皮细胞脱落不完整；OVA/GC组和OVA/Utilin组炎症改变明显减轻。2)流式细胞仪检测结果显示：(1)CD4+T淋巴细胞亚群中CD4+CD25+调节性T细胞百分率OVA组显著低于NS组,OVA/GC组和OVA/Utilin组较OVA组小鼠明显增加,差异有统计学意义(均P<0.01),而OVA/GC组和OVA/Utilin组CD4+T淋巴细胞亚群CD4+CD25+调节性T细胞百分率略高于NS组小鼠,OVA/Utilin组百分率接近OVA/GC组小鼠,差异均无统计学意义(均P>0.05)。(2)CD4+CD25+调节性T细胞上表达的TLR4平均荧光强度值OVA组较NS组降低,但差异无统计学意义(P>0.05);OVA/GC组和OVA/Utilin组较OVA组明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)；OVA/GC组较OVA/Utilin组稍低,差异无统计学意义(P>0.05)。(3)各组小鼠脾单个核细胞CD4+CD25+调节性T细胞上表达的TLR4平均荧光强度值与CD4+CD25+调节性T细胞百分率无相关性。结论：1)CD4+CD25+调节性T细胞参与了哮喘免疫平衡调节,其数量降低和功能障碍可导致和加重哮喘的症状。OVA不能改变TLR4的表达,CD4+CD25+调节性T细胞上的TLR4对OVA诱发的哮喘小鼠的发病没有作用。2)糖皮质激素可促进哮喘小鼠CD4+CD25+调节性T细胞数量的增加及TLR4的表达,可能是其治疗哮喘的免疫学机制之一。3)早期应用草分枝杆菌干预性治疗,可通过促进CD4+CD25+细胞上的TLR4的表达和CD4+CD25+调节性T细胞数目的增加,纠正了机体的免疫紊乱而发挥其治疗作用,有可能成为今后防治哮喘的新途径之一。4)哮喘体内是一个复杂的免疫网络,糖皮质激素和草分枝杆菌对CD4+CD25+调节性T细胞数量和TLR4表达的调节受多种因素影响。