论文部分内容阅读
目的:探讨蒙药沏其日甘-8对巨噬细胞表型转化的作用,进而观察沏其日甘-8对动脉粥样硬化炎症反应的影响。方法:将只72 Wistar雄性大鼠随机分成6组,每组12只,设正常对照组、动脉粥样硬化模型组、沏其日甘-8第一组(造模同时给药)、沏其日甘-8第二组(造模完给药)、辛伐他汀第一组(造模同时给药)、辛伐他汀第二组(造模完给药),每组给相应饲料及药物,连续饲养16周。1.第0、4、8、12、16周,观察各组大鼠体重及一般状态。2.观察沏其日甘-8对动脉粥样硬化大鼠血脂水平及主动脉病理变化的影响。3.观察沏其日甘-对动脉粥样硬化大鼠肝脏功能(8 ALT、AST)的影响。4.观察沏其日甘-8对动脉粥样硬化大鼠巨噬细胞表型转化的影响:(1)ELISA法检测巨噬细胞表型标志物,M1型巨噬细胞表型标志物为IL-6、、TNF-a i NOS;M2型巨噬细胞表型标志物为Dectin-1、、IL-10 Arg-1。(2)免疫组织化学法应用CD68标记所有巨噬细胞,i NOS标记M1型巨噬细胞,CD206标记型巨噬细胞M2,根据表达情况观察巨噬细胞分布情况。(3)根据RNA-Seq数据,观察巨噬细胞表型转化相关信号通路并验证相关基因表达情况。结果:1.各组大鼠体重及一般状态的结果:实验过程中,正常对照组大鼠精神皮毛光滑,运动量正常,精神状态良好;模型组大鼠皮毛粗糙,运动少,精神状态差;沏其日甘-8第一组、沏其日甘-8第二组、辛伐他汀第一组、辛伐他汀第二组大鼠皮毛光滑度,运动量,精神状态不同程度改善;各组大鼠体重无明显差异(P>0.05)。2.血脂及动脉病理变化结果:实验过程周末,与正常对照组比较,模型组大鼠血清12 TC、TG、LDL-C水平显著升高(P<0.05),HDL-C水平显著降低(P<0.05);主动脉病理切片显示,模型组内膜不光滑,镜下可见大量泡沫细胞,脂质沉积,斑块向血管腔内突入,中膜平滑肌细胞呈不规则增生,证明模型成立。实验过程16周末,与正常对照组比较,模型组大鼠血清TC、TG、LDL-C水平显著升高(P<0.05),HDL-C水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,沏其日甘-8第一组、沏其日甘第二组、辛伐他汀第一组、辛伐他汀第二组大鼠血清-8 TC、TG、LDL-C水平显著降低(P<0.05),HDL-C水平显著升高(P<0.05);与辛伐他汀第一组比较,沏其日甘-8第一组大鼠血清LDL-C水平显著降低(P<0.05);主动脉病理切片显示,与模型组比较,沏其日甘-8第一组、沏其日甘-8第二组、辛伐他汀第一组、辛伐他汀第二组主动脉病理变化不同程度改善。血清肝功(3.ALT、AST)检测结果:与正常对照组比较,模型组大鼠血清ALT、AST水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,沏其日甘-8第一组、沏其日甘-8第二组大鼠血清ALT、AST水平显著降低(P<0.05);与辛伐他汀第一组、辛伐他汀第二组比较,沏其日甘-8第一组、沏其日甘-8第二组大鼠血清ALT、AST水平显著降低(P<0.05)。4.沏其日甘-8对动脉粥样硬化大鼠巨噬细胞表型转化的影响:(1)ELISA法检测结果:与正常对照组比较,模型组大鼠血清IL-6、TNF-、a i N水平显著升高OS(P<0.05),Dectin-1、、IL-10 Arg-1水平无明显差异(P>0.05);与模型组比较,沏其日甘-8第一组、沏其日甘-8第二组、辛伐他汀第一组、辛伐他汀第二组大鼠血清IL-6、、TNF-a i N水平显著降低OS(P<0.05),Dectin-1、、IL-10 Arg-1水平显著增加(P<0.05)。(2)免疫组织化学法检测结果:在光镜下,与正常组比较,模型组、沏其日甘-8第一组、沏其日甘-8第二组、辛伐他汀第一组、辛伐他汀第二组均可见大量棕褐色沉着,示CD68,i NOS,CD206有阳性表达(P<0.05);与模型组比较,沏其日甘-8第一组、沏其日甘-8第二组、辛伐他汀第一组、辛伐他汀第二组CD68、i NOS的表达量显著降低(P<0.05),CD206的表达量显著升高()。(3)P<0.05 RNA-Seq结果显示:蒙药沏其日甘-8通过MAPK、IL-17、P13K/Akt、TNF信号通路抗动脉粥样硬化,其中P13K/Akt信号通路参与巨噬细胞表型转化过程。(4)基因Irf1,Cxcl10表达情况:在动脉组织中,与正常组比较,模型组Irf1,Cxcl10基因表达水平显著上调(P<0.05);与模型组比较,沏其日甘-8第一组、沏其日甘-8第二组Irf1,Cxcl10基因表达水平显著下调(P<0.05)。结论:1.蒙药沏其日甘-8能调节血脂水平。2.蒙药沏其日甘-8具有降低ALT、AST水平进而保护肝脏的作用。3.蒙药沏其日甘-8能够调控巨噬细胞表型转化,由促炎作用的M1型向抗炎作用的M2型转化。4.蒙药沏其日甘-8可能通过Irf-1,Cxcl10基因调控巨噬细胞表型转化。5.蒙药沏其日甘-8具有调节新陈代谢,活血化瘀的作用从而治疗精华不消化,血液“黄水”淤结于脉络导致的炎症反应。