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中药注射液是由中药单体或复方提取物精制而成的无菌制剂,其以生物利用度高、实用性强等突出优势,在临床疾病的防治中起着不可替代的作用。实践应用中,其常配伍其他药品以达到异病同治等多重的治疗效果。然而,中药注射液配伍后溶液的稳定性、安全性和有效性等基础性研究仍处薄弱环节。其中,中药注射液原料药的药效物质基础对其质量检测有着关键的把控作用,但目前中药被报道存在药效物质基础不明确的问题,这阻碍了中药注射液的安全性与质量评估、中药材质量控制和中医药现代化长足发展。因此,针对现目前中药注射液发展面临的瓶颈问题,本研究以抱茎苦荬菜(Ixeris sonchifolia Hance)的干燥全草制备而成的精制水提液,即苦碟子注射液为研究对象,基于原药材的药效物质基础考察其注射液的配伍稳定性。首先,采用生物信息学技术调取抱茎苦荬菜防治冠心病(Coronary heart disease,CHD)的潜在核心靶点,基于“亲和质谱(Affinity mass spectrometry,AMS)-原子力显微镜(Atomic force microscope,AFM)成像”技术逐层筛选并确证抱茎苦荬菜中的药效成分,并探讨其可能的作用机制;其次,以核心靶蛋白及潜在信号转导通路中与心肌细胞生长密切相关的靶点为导向,基于靶标深入挖掘抱茎苦荬菜中的其它潜在药效物质基础;最后,根据《中药注射剂安全性再评价研究》文件中的“稳定性研究评价”指示,对苦碟子注射液配伍稳定性进行考察。本研究旨在为中药注射液质量评价、中药药效物质基础研究、中药材质量控制和临床安全、精准用药提供参考。具体实验内容如下:1、基于“AMS-AFM成像”技术研究抱茎苦荬菜防治CHD的药效物质基础本研究中,首先借助网络药理学和生物信息学技术,发现血管内皮生长因子受体2(Vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)位于血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)信号转导途径的细胞膜上,是调控CHD的潜在核心靶蛋白。其次,基于VEGFR2采用AMS筛选抱茎苦荬菜中的活性成分,结果表明木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷是其潜在的活性分子;随后,采用AFM成像观察到该活性分子的加入使VEGFR2的分子形态发生了显著变化;并应用分子对接技术证实该小分子与VEGFR2的相互作用机理,发现其化学基团可以作用于VEGFR2的结合囊。最后,应用四甲基偶氮唑蓝(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测到该药效分子经特异性调控VEGFR2进而保护了心肌细胞免受氧化应激损伤,对CHD发挥着平衡作用。该研究综合确认了木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷是抱茎苦荬菜中的药效物质基础,并为其通过VEGF信号通路调控CHD提供了潜在作用机制。2、基于靶标深入挖掘抱茎苦荬菜中的其它潜在药效物质基础本模块以VEGFR2及VEGF信号转导通路中与心肌细胞生长密切相关的靶点为导向,基于网络药理学确认“实验一”中抱茎苦荬菜中的53种主要“化学成分-靶点”列表内与目标靶点相关的药效成分。结果发现腺苷、单咖啡酰基酒石酸均与原癌基因酪氨酸蛋白激酶Src(Proto-oncogene tyrosine-protein kinase Src,Src)相关,木犀草素-7-O-葡萄糖苷、菊苣酸、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷均与Ras蛋白(Rat sarcoma,RAS)相关,推测药效成分进入体内后可能通过激活上游靶蛋白VEGFR2的表达,从而激活了其下游Src、Ras效应蛋白的表达得以发挥药理作用。而后,应用分子对接技术证实5种潜在“药效成分-VEGFR2”的亲和力打分值及各活性结合位点,并阐释其相互作用机理,验证揭示该5种药效成分均与VEGFR2分子间存在稳固的氢键,具一定的结合力。综合表明此5种药效成分为抱茎苦荬菜中的潜在药效物质基础。3、苦碟子注射液与两类稀释液及左卡尼汀注射液的配伍稳定性考察本实验模拟临床用药配比,主要从外观性状、p H值、紫外分光光度、不溶性微粒及6个目标药效成分含量变化等内容考察4℃、室温和30℃下“20181004、20181005和20181006三个批号的苦碟子注射液分别与5%葡萄糖注射液、0.9%氯化钠注射液及其与左卡尼汀注射液的配伍”稳定性。实验结果显示,同一温度下,同一个批号的各配伍溶液在0-8 h内外观澄明且无杂质,p H值、紫外分光光度及各药效成分含量变化趋势稳定;然而,当温度或注射液批号改变时,配伍溶液的p H值、紫外分光光度将稍有浮动但不影响溶液性质,各药效成分含量变化相对明显。同时,参照2015年版《中国药典》中对“标示装量为100 m L及以上的静脉用注射液”不溶性微粒数的规定要求,测得含5%葡萄糖注射液的各配伍溶液中,除“4℃20181006批苦碟子注射液与该稀释液及左卡尼汀注射液”的配伍溶液不溶性微粒在0-4 h符合外,其余均不符合规定范围;而含0.9%氯化钠注射液的各配伍结果提示临床应于室温下配伍,稍静置后随配随用。4、苦碟子注射液与常用溶媒及长春西汀注射液的配伍稳定性研究本研究配伍溶液的制备同“实验三”,考察结果表明同一温度同一个批号、同一温度不同批号或不同温度同一个批号的各配伍溶液在0-8 h测评时间内,溶液均澄清无杂质,其溶液酸碱性、紫外分光度在较小的范围内变动,而药效成分含量受温度、批号的影响变化明显。但是不同于“实验三”考察结果,此系列各配伍溶液的不溶性微粒数均超出了规定要求,因此其配伍稳定性仍需进一步证实。