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本文以鳞翅目昆虫柞蚕(A.pernyi)滞育蛹和虫草真菌(C.militaris)为试验材料,对利用柞蚕滞育蛹人工培养柞蚕蛹虫草的条件、培育出的柞蚕蛹虫草及诱导后柞蚕蛹中的抗菌物质进行了分离、纯化,并对其抗菌物质的活性以及诱导后虫体的生理生化指标的变化等方面进行了研究,结果表明:
1.人工培养柞蚕蛹虫草的关键阶段为光照培养以后,最佳温度、湿度、光照和pH值分别为22±2℃,80%,10h/d,pH5~7。
2.柞蚕蛹虫草经过水提、醇沉、去蛋白、去离子、脱色后,粗多糖的得率为2.611%,抑菌试验表明,该多糖对供试的金黄色葡萄球菌、枯草杆菌和苏云金芽孢杆菌有着非常明显的抑制作用;对柞蚕链球菌抑制作用稍弱,与前三者之间呈显著差异(P<0.05);对大肠杆菌和乳酸杆菌作用不明显;对供试真菌均没有抑制作用。
3.虫草菌诱导柞蚕蛹后血淋巴抑菌活性在3~4d达到最大值,对大部分供试细菌、真菌有作用。对其中的金黄色葡萄球菌和柞蚕链球菌的抑菌活性与对其它供试真菌、细菌的抑菌活性有显著差异(P<0.05);其次为乳酸杆菌;再次为大肠杆菌、小麦赤霉、烟草赤星、水稻恶苗、葡萄白腐、玉米小斑、番茄早疫病菌;然后为玉米弯孢和柞蚕白僵病菌;对其他供试菌株无作用。
大肠杆菌、柞蚕链球菌诱导柞蚕蛹后的同期血淋巴与虫草菌相比抑菌活性差别不明显;但经二者诱导柞蚕蛹提取液抑菌活性在蚕蛹死亡后逐渐减弱,直至消失;经虫草菌诱导柞蚕蛹硬化后提取液抑菌谱较硬化前发生变化,即:对苏云金芽孢杆菌的活性增强;对柞蚕链球菌的抑制作用减弱;对大肠杆菌、乳酸杆菌和供试真菌无明显抑菌作用;对原来没有作用的枯草杆菌产生明显的抑制作用。
4.对虫草菌诱导柞蚕蛹后的血淋巴,依次经过SephadexG-50、SephadexG-100凝胶过滤层析,CM-Sepharose Fast Flow阳离子交换层析,对其进行Tricine-SDS.PAGE电泳,得到分子量约为3kDa的抗菌肽。用抑菌圈法检测抑菌活性,发现分离纯化后得到的物质对供试的大部分细菌、真菌有明显的抑制作用,针对不同的菌种抑菌活性不同,对金黄色葡萄球菌和柞蚕链球菌的抑制作用较好,最低抑菌浓度为0.0125g/L。该物质在100℃处理10分钟后仍有活性;pH值为5左右活性最强,当pHi<2和pH≥9无抑菌活性。