论文部分内容阅读
目的建立卵蛋白(OVA)致敏激发后,在挪威褐鼠无创且清醒的状态下,可观察和记录到过敏性哮喘发作全过程即速发相(EAR)和迟发相(LAR)的动物模型。并应用此模型,研究雷公藤多苷(GTW)对过敏性哮喘EAR和LAR的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法第一部分：模型建立66只挪威褐鼠按致敏液(OVA和Al(OH)3)不同平均分为11组,单纯注射OVA的4组(0.01、0.1、1和10mg/只)；OVA混合Al(OH)3干粉的5组(0.1+100、1+100、10+100、1+52和1+4 mg/只)；OVA混合A1(OH)3胶体的1组(10+4 mg/只)；正常对照组1组。于第0天和第5天在每只动物背部选取2点进行皮下注射,对10个致敏组注射相应致敏液,对正常对照组注射生理盐水,每点均注射0.2m1。在第37天,所有动物雾化吸入5%OVA 10 min激发。然后立即放入体积描记器中连续记录16h呼气相延长参数(Penh)值,绘制Penh变化曲线,计算EAR Penh曲线下面积(AUC)、LAR AUC、EAR峰值、LAR峰值、LAR持续时间和EAR及LAR出现次数。采集第0、7、14、21、28、35、38天血清,用ELISA法检测血清中特异性IgE含量。HE染色观察肺病理改变。第二部分：药物治疗30只挪威褐鼠平均分为5组,即正常对照组、模型组和3个GTW组。采用OVA致敏激发挪威褐鼠,清醒动物体积描记器记录16 h反映气道阻力变化的Penh值,计算EAR AUC、LAR AUC、LAR持续时间,建立无创清醒挪威褐鼠过敏性哮喘发作全程记录模型。3个GTW组动物分别于第30至第37天灌胃给予GTW10、50和200mg·kg-1,每次2 mL,每天1次。正常对照组和模型组给予等量生理盐水。HE染色观察肺、肝和肾脏病理改变。检测谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、肌酐(CR)、血清尿素氮(BUN)值,分析药物肝肾毒性。采用实时荧光定量PCR的方法(RT2 Profiler PCR Array Rat Allergy & Asthma)筛选差异表达基因。结果第一部分：模型建立除单纯注射OVA 0.01mg组外,其他各组大鼠血清特异性IgE含量均比正常对照组显著升高(P<0.05),且在致敏1周后IgE开始大量产生,直到第5周均呈持续增长趋势(以OVA 10+Al(OH)3100组为例)。观察到了哮喘发作的速发和迟发双相气道反应,其特点表现在Penh值的显著增高,且与正常对照组相比,模型组(以OVA 10+Al(OH)3100、OVA 10+Al(OH)3 gel 4组为例)的EAR峰值、LAR峰值、LAR持续时间、EAR AUC和LARAUC均显著增大(P<0.05)。模型组(以OVA 10+Al(OH)3100组为例)有以气道周围嗜酸性粒细胞浸润为主的炎症表现。第二部分：药物治疗在给予GTW 50 mg·kg1治疗后特异性IgE含量比模型组显著降低(P<0.05)。给予GTW 10.50 和 200 mg·kg-1治疗后,EAR AUC.LAR AUC.LAR持续时间均比模型组显著降低(P<0.05)；生化指标ALT均比模型组显著升高(P<0.05),且随药物剂量增加,ALT数值增大；CR数值也均比模型组显著升高(P<0.05)；AST和BUN两个指标在给药后没有明显变化；均未对肝肾造成明显毒性病理改变。GTW能减轻肺部嗜酸性粒细胞浸润,且随剂量增加嗜酸性粒细胞数量减少。GTW能使过敏性哮喘中异常调节的基因发生明显改善,其中变化最明显的基因为Mmp9,在药物治疗后出现明显下调,且下调强度有剂量依赖性增强的趋势,在给予GTW 10、50和200 mg.kg1治疗后,下调3.62、7.67、38.15倍(P<0.05)。结论在OVA激发后观察到了哮喘发作全程,成功建立了非创伤性、清醒状态挪威褐鼠的过敏性哮喘发作全程记录模型。确立以稳定出现哮喘EAR和LAR的OVA 10+Al(OH)3100组方法为本模型的最佳造模方法。发现GTW能减轻哮喘发作时的EAR和LAR,对哮喘有治疗作用,其可能主要通过下调Mmp9的表达而达到治疗目的；同时也表明该模型可以作为一个较好的工具应用于哮喘治疗研究。