CCK-8法在突发性聋糖皮质激素敏感性试验的应用及其与突聋预后相关性分析

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目的:突发性聋(sudden sensorineural hearing loss,SSNHL)是耳科常见的急诊之一,目前SSNHL的发病率约5/10万-30/10万,有研究认为其发病率甚至可以高达160/10万。由于其病因复杂,疗效不定,预后不明确,致聋的后果不容忽视。目前 SSNHL 国际公认的治疗药物为糖皮质激素(glucocorticoid,GC),但部分患者显示GC治疗无效。SSNHL预后影响因素以及有无预判SSNHL的GC治疗敏感性手段目前仍无定论,外周血单核细胞(peripheral blood monomuclear cell,PBMC)体外培养后进行药物的增殖抑制试验在很多慢性炎症型疾病中可以用来预估药物治疗的敏感性。SSNHL的预后是否与GC敏感性相关以及是否可以用PBMC体外增殖GC抑制试验(in vitro proliferation of GC inhibition text,IVPGCIT)来预判,目前尚不清楚。因此,本研究通过CCK-8法测定SSNHL患者体外PBMC的GC敏感性,比较不同预后患者的PBMC的地塞米松(dexamethasone,DEX)增殖抑制率(简称DEX抑制率),从而探讨CCK-8法在临床应用的可行性及IVPGCIT在预估SSNHL预后中的作用,并进行SSNHL预后相关因素的分析。方法:本研究共纳入126名SSNHL患者,治疗前0.25-8kHz的平均纯音听阈均>60dB,其中初发型35耳,难治型91耳,全部于治疗前采空腹静脉血10ml提取PBMC放置于96孔板中进行体外增殖抑制实验:A组为;仅含PBMC、RPMI 1640培养基和10%患者自体血浆;B组为在A组基础上加入脂多糖(lip polysaccharide,LPS)(终浓度1ug/ml),刺激PBMC增殖;C组为B组基础上加入DEX(终浓度10-6M),抑制PBMC的增殖。将三组细胞分别加入96孔板并放置于恒温37℃、5%CO2细胞培养箱中孵育48小时,显微镜下观察细胞生长情况,并于培养48小时后加入细胞增殖-毒性检测试剂(Cell Counting Kit-8,CCK-8)溶液继续孵育4小时,检测其在450nm波长处的吸光度值,用公式(B-C)/(B-A)得出值即为抑制率(%),分析其与SSNHL预后的关系,了解DEX抑制率的影响因素,并分析年龄、发病至就诊时间、性别、耳别、听力损失程度、眩晕耳鸣等因素对SSNHL预后的影响。结果:总126例患者中:性别、耳别、年龄、有无耳鸣或眩晕、听力损失程度与DEX抑制率无关(秩和检验,P均<0.05),初发组的DEX抑制率明显高于难治组(Z=-3.146,P=0.002),GC有效组的DEX抑制率显著高于GC无效组(Z=-9.28,P=0.000)。初发组和难治组中均显示了 GC有效组比GC无效组有显著的听力改善(P均<0.05),且分频率(0.25-8kHz)亦有统计学差异(P均<0.05)。初发组及难治组中均显示了有效组的听力改善值从低频到高频呈下降趋势。将SSNHL患者分为初发组和难治组分别进行统计学分析,初发组:年龄、性别、耳别、有无耳鸣、听力损失程度与预后无关,眩晕对预后有影响,且不伴眩晕的预后较好(P=0.027),不同发病至就诊时间的预后有统计学差异(P=0.039),且发病至就诊时间与听力改善值之间呈负线性相关(R2=0.266,P=0.002)。不同DEX抑制率间疗效有统计学差异(P=0.000)。DEX抑制率越高疗效越好。进一步分析DEX抑制率与听力改善值之间的关系得出:DEX抑制率与听力改善值之间呈正线性相关(R2=0.915)。难治组:治疗有效率与年龄、性别、耳别、有无耳鸣或眩晕、听力损失程度、激素的局部使用方式均无关,不同发病至就诊时间的预后有统计学差异(χ2=11.578,P=0.003),且发病至就诊与听力改善值之间呈负线性相关(R2=0.118,P=0.001)。62.6%患者采取耳后骨膜下注射甲强龙,37.4%采取鼓室内灌注甲强龙。总治疗有效率为39.6%,其中显效率为17.6%。不同DEX抑制率间疗效有统计学差异(χ2=39.163,P=0.000)。DEX抑制率与听力改善值之间也呈正线性相关(R2=0.712)。结论:以上结果表明,SSNHL患者预后与眩晕、发病至就诊时间及GC敏感性有关,且与GC敏感性关系更大,与年龄、性别、耳别、有无耳鸣、激素的局部使用方式、听力损失程度无关。SSNHL患者的GC敏感性不受性别、耳别、年龄、有无耳鸣或眩晕、听力损失程度影响。随着DEX抑制率增高,听力改善值增加,两者呈正线性相关。全身使用糖皮质激素治疗早期无效的患者,经过局部糖皮质激素加抗氧化剂治疗仍然可以改善部分患者的听力。CCK-8法检测的DEX抑制率可用于临床上预估SSNHL的预后,为SSNHL的个性化治疗方案提供参考。
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