论文部分内容阅读
目前研究发现类病毒存在着分子间及分子内重组的现象,由于类病毒的重组对类病毒的进化起重要作用,也和类病毒的致病性密切相关,因此研究类病毒分子间及分子内重组体将对深入研究类病毒重组进化机理、致病性等具有重要意义。本文主要开展了对锦紫苏类病毒分子间重组体以及啤酒花矮化类病毒分子内重组突变体(HSVd D-15)的研究工作。1.锦紫苏是一类在世界范围内广泛种植的观叶性草本植物,目前发现能够侵染锦紫苏的类病毒共有4种:锦紫苏类病毒1-4(CbVd-1-4)且这些类病毒间存在着分子间杂合重组的现象。本文在对我国锦紫苏上类病毒的发生调查时发现了两种新的类病毒RNA。通过对天津‘陈旭’锦紫苏样品中这两种类病毒RNA的克隆测序、二级结构预测、序列比较分析及生物学活性的检测,证实其为锦紫苏类病毒属中的两个新种,并将其命名为:CbVd-5和CbVd-6。CbVd-5的一级序列与已知类病毒的最高相似性仅有66%,但在它的中央保守区(CCR)上却保留着锦紫苏类病毒属的保守序列,同时在其左末端区(LT)和右末端区(RT)中含有与其它锦紫苏类病毒的部分同源序列;推测这些保守序列对该类病毒的繁殖复制、重组进化具有重要意义。CbVd-6分别与CbVd-3的左半端序列和CbVd-5的右半端序列具有高度的同源性。该类病毒的发现进一步证明了锦紫苏类病毒间高效重组的分子特性,将对深入研究该类病毒的重组进化机理具有重要意义。2. HSVd D-15是由本研究室发现并报道的首例啤酒花矮化类病毒(HSVd)大型分子内重组突变体,其与HSVd其它序列相比,在碱基位置244-245之间插入了与碱基位置230-244序列完全一样的15个碱基。为研究其生物学活性,本文分别构建了含有HSVd和HSVd D-15 cDNA加倍串联序列的重组质粒,并对其在指示植株四叶黄瓜上的侵染活性进行了检测。结果表明,仅在接种了含有HSVd cDNA多倍串联序列重组质粒的黄瓜上检测到HSVd的侵染,在同样条件下接种了含有HSVd D-15 cDNA两倍串联序列重组质粒的黄瓜上未检测到子代类病毒。HSVd D-15的生物学活性还需通过改进接种方法或将其接种无毒的李树苗木来进一步研究。含有HSVd D-15 cDNA两倍串联序列重组质粒的成功构建,为进一步研究HSVd D-15在其自然寄主李树上的生物学活性奠定了工作基础。本研究共完成了3条CbVd-5序列(FJ151370-151372)和2条CbVd-6序列(FJ615418-615419)的GenBank登录。