高产二十二碳六烯酸隐甲藻的选育及发酵特性研究

来源 :合肥工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lzm8020117
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利用隐甲藻发酵生产二十二碳六烯酸具有发酵周期短、产品纯度高等优点,但同时也存在产品产量低等缺陷,因此优良菌株的诱变选育具有一定的现实意义。本文首先研究了隐甲藻藻种的最适保存方法;采用亚硝基胍对原始藻种进行诱变处理,筛选出一株遗传性状稳定的高产藻株;全面系统的考察了影响其生长和二十二碳六烯酸合成的主要因素,明确了一些关键因素的最优水平;最后进行了高产藻株的分批补料发酵试验。采用低温冷藏和低温黑暗两种保存方法对隐甲藻ATCC30556进行保存处理,并加入20%的甘油作为冷冻保护剂,90天后以藻种存活率、再生长能力为评价指标,确定了藻种的最佳保存方法为低温黑暗保存。采用此种方法进行保存处理,藻种的存活率达到了82.4%,且再生能力强,发酵能力实验表明藻种未出现退化现象。选用不同剂量的亚硝基胍对出发藻株进行诱变处理,确定了适宜的诱变剂量,通过30℃高温培养初筛,摇瓶发酵复筛的选育方法,得到一株二十二碳六烯酸产量稳定提高的突变株,命名为LS1057,其二十二碳六烯酸占总脂肪酸的含量从出发株的25.78%提高到32.02%。采用单因素实验,研究了摇瓶发酵条件对突变株发酵的影响,结果表明:在初始pH6.5、温度26℃、转速150r/min的发酵条件下培养216h后,其生物量、总油脂产量及二十二碳六烯酸产量分别达到14.06g/L、3.14g/L和1.057g/L,分别比出发株提高了21.31%、69.73%和121.59%。采用Plackett-Burman试验设计法考察发酵培养基中各组分对二十二碳六烯酸产量的影响,结果表明:葡萄糖、酵母膏、KH2PO4的浓度对二十二碳六烯酸的产量影响显著。再用最陡爬坡路径逼近最大响应区域,并结合Box-Behnken实验设计和响应面分析法对3个显著因素进行回归分析,得到优化的发酵培养基组成:葡萄糖79.76g/L、酵母膏14g/L、KH2PO40.5g/L、海盐2.0g/L、MgSO47H2O5.0g/L、KNO38.0g/L、FeSO47H2O0.2g/L和M液(M液:VB10.6g/L,VB120.1mg/L)1%(v/v)。采用该法优化培养基,供试藻株的二十二碳六烯酸产量达到了1.811g/L,较优化前提高了71.33%。对突变株LS1057的发酵罐发酵能力进行了考察。采用分批补料的方式进行发酵试验,发酵结束后,菌株生物量达到28.13g/L,总油脂含量为23.49%,二十二碳六烯酸终产量为2.112g/L,比摇瓶发酵的1.811g/L提高了16.62%;且二十二碳六烯酸含量与摇瓶发酵相比无显著性差异。实验结果表明突变株LS1057具有较好的发酵特性,也进一步验证了亚硝基胍诱变效果和筛选方法的可行性。
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