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P-gp/MDR1和ABCG2/BCRP是ABC膜转运蛋白家族成员,表达于足月胎盘合体滋养层的母体面胞膜,,可以通过主动转运的方式,特异性地清除一些内源性的毒物或异生物,从而影响抗病毒药物等底物在胎盘滋养细胞的转运。因此,通过调控P-gp/MDR1和ABCG2/BCRP的表达,可提高抗病毒药物进入滋养细胞和胎儿血循环的浓度,更有效地阻断乙型肝炎的宫内感染。目的:研究妊娠合并乙型肝炎胎盘P-gp/MDR1和ABCG2/BCRP的表达,及其与乙肝感染的相关性。方法:1.采用免疫组化技术,检测胎盘组织中P-gp/MDR1和ABCG2/BCRP的表达和定位。2.采用荧光定量PCR技术检测人胎盘组织中P-gp/MDR1 mRNA和ABCG2/BCRP mRNA的表达。比较乙肝感染胎盘与正常孕妇胎盘中P-gp/MDR1 mRNA和ABCG2/BCRP mRNA的表达的差异。3.采用Westernblot技术检测人胎盘组织中P-gp/MDR1和ABCG2/BCRP蛋白质水平的表达。比较乙肝感染胎盘与正常孕妇胎盘中P-gp/MDR1和ABCG2/BCRP蛋白表达的差异。4.用ELISA检测胎盘组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量。分析人胎盘组织中P-gp/MDR1和ABCG2/BCRP的表达与IL-1β、IL-6和TNF-α的相关性。5.体外培养人胎盘滋养细胞BeWo和JEG-3,分别加IL-1β、IL-6干预后,用荧光定量PCR检测细胞P-gp/MDR1和ABCG2/BCRP表达的变化。进一步探讨人胎盘滋养细胞P-gp/MDR1、ABCG2/BCRP的表达与IL-1β和IL-6的相关性。6.体外培养人胎盘滋养细胞BeWo,分别加IL-1β、IL-6干预后,用HPLC检测3TC在滋养细胞的滤过率的变化。结果:1.免疫组化结果显示,乙肝感染胎盘与正常孕妇胎盘中滋养细胞母体面胞膜均有P-gp/MDR1和ABCG2/BCRP表达。P-gp/MDR1和ABCG2/BCRP在足月妊娠胎盘组织中主要表达于胎盘合体滋养细胞母体面胞膜。与以往报道相似,部分合体滋养层细胞高表达,也有部分合体滋养层细胞不表达。2.荧光定量PCR显示,乙肝感染胎盘P-gp/MDR1 mRNA和ABCG2/BCRPmRNA的表达均高于正常组,差别有显著性。3.Westernblot显示,乙肝感染胎盘P-gp/MDR1和ABCG2/BCRP蛋白的表达均高于正常组,差别有显著性。HBV感染胎盘组织P-gp/MDR1和ABCG2/BCRP蛋白质水平表达分别是正常足月胎盘表达量的2.43和3.76倍。与相对应的Real Time PCR结果的相关系数为0.980、0.963。4.ELISA检测胎盘组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量,乙肝组均高于正常组,乙肝组胎盘IL-1β、IL-6和TNF-α表达量分别是正常组的4.36、1.91、5.12倍。IL-1β、IL-6和TNF-α与P-gp/MDR1和ABCG2/BCRP的表达均有相关性。5.体外培养人胎盘滋养细胞BeWo和JEG3,分别加IL-1β、IL-6干预12、24、48、72小时后,用荧光定量PCR检测细胞P-gp/MDR1 mRNA和ABCG2/BCRP mRNA表达均升高,差别有显著性。P-gp/MDR1 mRNA和ABCG2/BCRP mRNA表达随着IL-1β和IL-6作用时间的延长逐渐升高。6.体外培养人胎盘滋养细胞BeWo,分别加IL-1β、IL-6干预48、72小时后,3TC在细胞的滤过率显著降低。结论:1.乙肝感染胎盘与正常孕妇胎盘中滋养细胞膜均有P-gp/MDR1和ABCG2/BCRP表达。2.乙肝感染胎盘P-gp/MDR1 mRNA和ABCG2/BCRP mRNA的表达均高于正常组。3.乙肝感染胎盘P-gp/MDR1和ABCG2/BCRP蛋白的表达均高于正常组。P-gp/MDR1和ABCG2/BCRP蛋白表达升高可能与P-gp/MDR1 mRNA和ABCG2/BCRP mRNA转录增强有关。4.胎盘组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量,乙肝组均高于正常组,IL-1β、IL-6和TNF-α与P-gp/MDR1、ABCG2/BCRP的表达均有相关性。提示IL-1β、IL-6和TNF-α可能诱导P-gp/MDR1 mRNA和ABCG2/BCRP mRNA转录增强以及P-gp/MDR1和ABCG2/BCRP蛋白表达。5.体外培养人胎盘滋养细胞BeWo和JEG3,分别加IL-1β、IL-6干预12、24、48、72小时后,P-gp/MDR1 mRNA和ABCG2/BCRP mRNA表达均升高。P-gp/MDR1 mRNA和ABCG2/BCRP mRNA表达随着IL-1β和IL-6作用时间的延长逐渐升高。提示IL-1β和IL-6可能在转录水平上调P-gp/MDR1mRNA和ABCG2/BCRP mRNA的表达。6.体外培养人胎盘滋养细胞BeWo,分别加IL-1β、IL-6干预后,3TC在细胞的滤过率显著降低。可能与IL-1β、IL-6诱导的P-gp/MDR1和ABCG2/BCRP表达上调有关。