重组人促红细胞生成素对癫痫持续状态后大鼠海马齿状回神经元变性、细胞增值和苔藓纤维发芽的影响

来源 :泸州医学院 西南医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:war3mx1017
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目的:探讨重组人促红细胞生成素对成年大鼠癫痫持续状态后海马齿状回神经元变性、细胞增值和苔藓纤维发芽的影响。方法:(1)模型制作与分组:选用清洁级健康雄性成年SD大鼠140只,随机分为正常对照组20只,腹腔注射等量无菌生理盐水,余120只采用氯化锂-匹罗卡品致痫试验方法制作颞叶癫痫模型,并根据Racine标准判定癫痫发作的程度进行分级,选取痫性状态(SE,statusepilepticus)持续1h及以上者入选,并再随机等分为重组人促红细胞生成素(Recombinant Human Erythropietin, r-HuEPO)+SE组(干预组)和SE组(未干预组),干预组于SE后6h每只再腹腔注射r-HuEPO 5000IU/只,将最终存活的模型大鼠用于下一步试验,每组每次实验动物数均为4只,以海马齿状回为研究部位;(2)于造模后第4天以FJ-B (Fluoro-Jade B)行免疫荧光检测,观察海马齿状回的神经元变性情况;(3)于第9天取材并以BrdU(5-bromodeoxyuridine,5-溴脱氧尿核苷)行免疫组化检测,观察齿状回的细胞增殖情况;于第14天取材行Timm’s染色,观察齿状回苔藓纤维发芽情况;(4)于第28天取材同时进行BrdU免疫组化实验和Timm’s染色。结果:(1)实验大鼠腹腔注射氯化锂-匹罗卡品后,SE诱发成功率为88.57%,总死亡率70.17%;(2)FJ.-B染色结果显示:SE后第四天,海马齿状回变性神经元在SE组较SE+r-HuEPO组和对照组明显,尤其是SE组,主要集中于齿状回SGZ (subgranular zone,颗粒细胞下区)和门区:SE组(32.32±5.09)与对照组(6.50±1.08)相比P<0.01,SE组与SE+r-HuEPO组(11.12±0.75)相比P<0.01, SE+r-HuEPO组与对照组比P>0.05;(3)BrdU免疫组化染色结果:SE后第9天,BrdU免疫反应阳性细胞在sE组明显增加,主要集中于颗粒下区,呈丛集性分布;SE+r-HuEPO组增加不明显,仍主要分布于颗粒下区,呈散在分布;对照组也有很少量免疫反应阳性细胞散在分布;SE组(92.8±2.97)与对照组(12.80±2.13)比P<0.01,SE组与SE+r-HuEP0(16.95±0.54)组比P<0.01, SE+r-HuEPO组与对照组比P>0.05;第28天,在SE组BrdU免疫反应阳性细胞进一步明显增多,并大量向门区迁移,部分分布到颗粒细胞层和内分子层,SE+r-HuEPO组BrdU免疫反应阳性细胞数量虽然也增加并也有部分向门区迁移,但增加不明显;对照组BrdU免疫反应阳性细胞增加不明显,而且仍主要位于颗粒下区,SE组(146.45±5.91)与对照组(38.52±3.10)比P<0.01,SE组与SE+r-HuEPO组(46.27±2.93)比P<0.01, SE+r-HuEPO组与对照组比P>0.05;(4)Timm’s染色结果:SE后第14天,各组Timm’s染色颗粒增加不明显,但SE组(0.45±0.19)与对照组(0.10±0.11)比P<0.05;在第28天,SE组苔藓纤维发芽明显,并在内分子层连接成致密的带状,SE+r-HuEPO组评分虽有增加,但和对照组比较差异不明显;SE组(3.60±0.16)与对照组(0.30±0.11)比P<0.01,SE与SE+r-HuEPO组(0.55±0.10)比P<0.01, SE+r-HuEPO组与对照组比P>0.05。结论:(1)癫痫持续状态能诱发大鼠海马齿状回神经元变性和细胞增殖,并且大量新生的细胞向门区迁移,部分向内分子层迁移。同时也会导致齿状回神经元的苔藓纤维发芽,发芽的纤维向内分子层延伸。(2)人促红细胞生成素对癫痫持续状态发作后的7-8W龄雄性SD大鼠,在统计学上不能降低其死亡率;(3)人促红细胞生成素对癫痫持续状态发作后的大鼠,能降低其神经元变性和癫痫持续状态发作后的细胞增殖,并能抑制齿状回的苔藓纤维发芽。
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