论文部分内容阅读
根据GENBANK数据库中大肠杆菌(Escheriachia coli)的磷酸甘露糖异构酶基因(phosphomannose isomerase PMI)序列设计引物,通过PCR的方法得到约1200bp片段并与克隆载体pGM-T easy连接,经测序证明与已发表PMI序列同源性达到100%。将其作为选择基因,构建到植物表达载体pBI-121上,得到可以在含有甘露糖的培养基上筛选的pBI-PMI、pBI-NPTII-PMI及pBI-k88-PMI的表达载体。通过对普通烟草(Nicotiana tabacum L.)、番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)、紫花苜蓿(Medicago sativa L.)和甜瓜(Cucumis melon L.)(伽师瓜)的甘露糖敏感性测验结果发现:普通烟草和紫花苜蓿不能用此转化系统进行筛选。甜瓜(伽师瓜)和番茄LIGEER 87-5可以用并得到较适合的筛选培养基:甘露糖浓度分别是19%和8%。以甜瓜(伽师瓜)(Cucumis melon L.),番茄(Lycopersicon escμlentum Mill.) LIGEER 87-5为受体材料,通过根癌农杆菌EHA105(pBI-PMI、pBI-NPTII-PMI及pBI-k88-PMI)介导进行转化,获得了一批经甘露糖筛选后的甜瓜和番茄芽,且这些分化芽能够在含有甘露糖培养基上生长。通过氯酚红(CPR)法对转基因甜瓜叶片的磷酸甘露糖异构酶做了定性分析,进一步证明成功建立了以PMI为标记基因的选择系统。实验结果表明,此转化系统可以用于转基因甜瓜和转基因番茄的筛选。